1 .一种含鱼肉基质的副溶血性弧菌标准物质，其特征在于：其制备方法包括以下步骤： 1）保存液的配制：将副溶血性弧菌标准菌株冻干粉用3%氯化钠碱性蛋白胨水溶解后于 36±1 ℃培养8～18 h，后于弧菌显色培养基平板上划线分离，在36±1 ℃恒温培养18～24 h；然后挑取单菌落接种于3%氯化钠碱性蛋白胨水中，36±1 ℃培养8～18 h；吸取500 μL菌 液于无菌离心管中，加入500 μL质量浓度为40%的无菌甘油，混合，制成保存液； 2）基质预处理：鱼肉剔除脂肪组织和筋，冷冻干燥后脱水率为76%。然后将脱水鱼肉粉 碎至组织细度为50目，采用60Coγ辐射灭菌后分装备用； 3）混悬液的配制：按1g鱼肉基质加入9mL无菌水的比例，将预处理后的鱼肉基质与水混 合成基质悬液，再加入其3倍体积的保护剂，混合制得混悬液； 4）标准物质的制备：取步骤1）制备的保存液20 μL加于200 mL3%氯化钠碱性蛋白胨水 中36±1 ℃下进行培养，并利用多功能酶标仪定时取样测定培养液的OD600 nm值，当OD600 nm 为0 .335±0 .1时停止培养，得新鲜菌液，然后将新鲜菌液按混悬液体积浓度1%加入到步骤 3）制得的混悬液中，于恒温振荡器上300r/min摇匀30min，再按2mL/瓶进行分装，其含菌量 为4 .5×104 ~ 6 .1×104 CFU/mL，最后经冷冻干燥，制得标准物质； 5）检验：将所得标准物质进行菌种鉴定、均匀性验证、定值、稳定性检验，制得成品。

2 .根据权利要求1所述含鱼肉基质的副溶血性弧菌标准物质，其特征在于：步骤1）所得 保存液的平均菌数为5 .3×108 CFU/mL。

3 .根据权利要求1所述含鱼肉基质的副溶血性弧菌标准物质，其特征在于：步骤2）所用 鱼肉需先经检测不含抗生素；所用60Coγ的辐射剂量为6KGY。

4 .根据权利要求1所述含鱼肉基质的副溶血性弧菌标准物质，其特征在于：步骤3）所述 保护剂是将脱脂乳、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮和水按体积比6:10:1:3混合而成。

5 .根据权利要求1所述含鱼肉基质的副溶血性弧菌标准物质，其特征在于：步骤4）经冷 冻干燥后所得标准物质中含菌量为100 ~ 350 CFU/瓶.

一种含鱼肉基质的副溶血性弧菌标准物质

技术领域

[0001] 本发明属于食品微生物技术领域，具体涉及一种含鱼肉基质的副溶血性弧菌标准物质。

背景技术

[0002] 菌种标准物质是生物特性标准物质中较为特殊的一类，通过使用菌种标准物质能 够有效保证微生物定量检测高效、准确地运行，但目前国内仅在出入境检验检疫系统内少 数几个局在研制，大部分的标准物质都是靠国外引进。2006年，辽宁出入境检验检疫局所研 制的食品中微生物菌落总数标准物质被批准为国家二级标准物质。该标准物质包含两种研 制方法：一种是以模拟食品实物，添加肠杆菌、沙雷氏菌、芽孢杆菌等具有标准号、可溯源性 的菌株经冷冻干燥制成的：另一种是以鱼粉为基质与上述细菌混合经冷冻干燥制成的，而 我国在食品基质的食源性致病微生物标准物质领域仍是空白，因此研制添加基质的微生物 定量标准物质有重要意义。

[0003] 副溶血性弧菌广泛分布在沿海和海水中，此菌主要感染水产品，是我国沿海地区 食物中毒中最常见的一种病原菌。食用感染水产品的易感者男女老幼均可患病引起胃肠炎爆发，但以青壮年为多，病后免疫力不强，可重复感染。本病多发生于夏秋沿海地区，常造成 集体发病。近年来沿海地区发病有增多的趋势。潜伏期自1小时至4天不等。临床上以急性起 病腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状，严重者可出现全身痉挛甚至急性肾功能衰竭。在日本、东南亚、美国及我国台湾地区皆多见。

[0004] 本发明以副溶血性弧菌为目标菌，通过添加无菌鱼肉粉，配合冻干保护剂，经冷冻 干燥、不确定度评估以及对特性值进行均匀性检测和稳定性追踪，得到含一定菌数的含鱼 肉基质的副溶血性弧菌标准物质，并形成了一套食品基质的食源性致病微生物标准物质的制备工艺。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于提供一种含鱼肉基质的副溶血性弧菌标准物质，其具有良好的均匀性，且品质稳定、质量可控，适用于微生物高效、准确的定量检测。

[0006] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

[0007] 一种含鱼肉基质的副溶血性弧菌标准物质，其制备方法包括以下步骤：

[0008] 1)保存液的配制：将副溶血性弧菌标准菌株冻干粉用3％氯化钠碱性蛋白胨水溶 解后于36±1℃培养8～18h，后于弧菌显色培养基平板上划线分离，在36±1℃恒温培养18 ～24h；然后挑取单菌落接种于3％氯化钠碱性蛋白胨水中，36±1℃培养8～18h；吸取500μL 菌液于无菌离心管中，加入500μL质量浓度为40％的无菌甘油，混合，制成保存液；

[0009] 2)基质预处理：鱼肉剔除脂肪组织和筋，冷冻干燥后脱水率为76％。然后将脱水鱼 肉粉碎至组织细度为50目，采用60Coγ辐射灭菌后分装备用；