邻苯二甲酸酯（phthalateesters，PAEs）是一类内分泌干扰物，具有类雌激素作用和抗雄激素作用，可干扰机体内分泌系统，导致生殖发育系统异常，并且具有一定的肝脏毒性和致癌作用。PAEs可通过呼吸道、消化道和皮肤等途径进入人体，并在体内发生代谢。

目前，PAEs人体内暴露评价普遍采用体内邻苯二甲酸酯代谢物作为生物标志物，对人体中邻苯二甲酸酯代谢物的研究将为PAEs的暴露评价提供重要信息。目前，环境中的PAEs含量分析方法比较多，但是关于人体血液中的含量研究则相对较少。研究表明，PAEs作为环境内分泌干扰物，其对动物机体，尤其对于雄性个体具有生殖发育毒性和内分泌干扰作用，且具有致癌性和致突变性。因此，建立一种简单、快速测定人血液中的痕量的PAEs的分析方法具有很重要的意义。

本研究采用样品冷冻干燥、ASE快速溶剂萃取的方式处理样品，使用液相色谱-质谱联用分析技术，检测血液样本中的8种邻苯二甲酸单酯（mono-PAEs或m-PAEs），以分析珠三角地区成年男性血液中PAEs暴露水平。

1实验

1.1仪器与试剂

仪器：1200-QQQ6410B液体相色谱/质谱联用仪（Agilent，美国）；ASE-150快速溶剂萃取仪（DIONEX，美国）；4KBTXL-75冷冻干燥机（VirTis，美国）；ADA10超纯水仪（Millipore，美国）。试剂：m-PAEs标准品：MMP、MEP、MBP、MiBP、MBzP、MHP、MEHP、MnOP（Aldrich，美国）；回收率指示物：D4-MnBP（Aldrich，美国）；甲醇、醋酸、正己烷和丙酮（色谱纯，CNW，美国）；硅藻土（DIONEX，美国）

1.2实验条件

1.2.1色谱条件AgilentZORBAXEclipsePlusC18色谱柱（100mm×2.1mm，1.8µm）；ODSHypersil预处理柱（2.1mm×10mm，5µm）；流速：0.5mL/min。流动相：体积分数为0.01%甲酸水溶液（A）和甲醇（B）。流动相梯度：0~5min50%A；5~6min50%~40%A；6~12min40%A；12~12.5min40%~15%A；12.5~20min15%A；20~20.5min15%~50%A；20.5~25min50%A。柱温：40℃；进样体积：10μL。

1.2.2质谱条件离子源电喷雾式离子源（electrosprayionization，ESI），负离子扫描模式；监测方式为多重反应监测（multiplereactionmonitoring，MRM）；离子源电压（喷雾电压）为–4000V；干燥气为氮气，流速为9mL/min，温度350℃；雾化器压力2.4?105Pa（35Psi）；碰撞气为氮气。

1.3样品前处理

（1）冷冻干燥。采集的血液样品保存于超低温冰箱（–80℃）中，取出后拿下盖子，用锡箔纸包好杯口，用针在锡箔纸上均匀扎孔；放入完成预冷的冷冻干燥机内进行冷冻干燥，干燥24h，完成干燥后取出样品，冻干率11.12%；保存于超低温冰箱（–80℃），待分析。

（2）ASE萃取方法。准确称取生物样品于萃取池中，加入PAHs回收率指示物。ASE提取条件：第一步：温度100℃，压力1.034?107Pa（1500Psi），甲醇静态提取1个循环，循环持续5min，以池体积60%的溶剂量冲洗提取池，氮气吹扫60s；第二步：温度100℃，压力1.034?107Pa（1500Psi），正己烷-甲醇（体积比为1∶1）静态提取3个循环，循环持续5min；以池体积60%的溶剂量冲洗提取池，氮气吹扫60s；合并萃取液，洗脱液氮气吹干，甲醇定容至500?L，LC-MS分析。

1.4质量控制与保证（QA/QC）

在优化条件下，分别测定不同浓度的m-PAEs混合标准溶液的峰面积，采用外标法定量。以标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图，绘制标准曲线。以信噪比为3时的对应浓度作为方法的检出限（limitofdetection，简称LOD），以信噪比为10时的对应浓度作为方法的定量限（limitofquantification，简称LOQ），根据低水平空白加标样品6次平行分析结果的标准偏差计算获取m-PAEs的方法相关系数，检出限和定量限。取一定量生物样品，分别加入不同浓度的m-PAEs标准混合溶液以及相应量的回收率指示物，在确定的分析条件下，平行测定6次，计算m-PAEs及其m-PAEs回收率指示物的回收率与精密度。