皮质醇（cortrsol）是肾上腺皮质细胞分泌的高效能生物化学物质，是人体一种重要的内源性糖皮质类激素：皮质醇可以调节人体的糖类、蛋白质和脂肪的新陈代谢:此外，皮质醇还是一种重要的应激激素.当面临重大应激、抑郁或者某些系统性疾病时,人体内的皮质醇含量会显著上升叭国内外对职业紧张和皮质醇分泌的关系进行了研究，证实职业紧张可导致皮质醇分泌增加叫职业紧张可作为一种紧张信号被中枢神经系统接受和整合并传递给下丘脑，下丘脑接受刺激信号分析促肾上腺皮质激素释放激素（Corticopropinreleasinghomo,CRH）增多作用与垂体释放促肾上腺皮质激素（adrenocoricofropic,ACTH）,促进肾上腺皮质合成，释放皮质醇.使体内皮质醇浓度升高讥目前测定人体内源性皮质醇含量的生物基质主要有血液、唾液、尿液和头发血清中的大部分的皮质醇与皮质类固醇结合球蛋白（corticosteroid-bindingglobulin,CBG）、白蛋白结合，游离皮质醇仅占3%~5%,因此血清皮质醇的测定受肝功能、妊娠等因素影响较大;24h尿液游离皮质醇在标本的采集过程中尿液的收集、计量很困难。

有研究表明唾液与血液中皮质醇含量高度相关叫唾液皮质醇主要以游离皮质醇形式存在，且具有提取方法简便.标本易获得等优点。但由于唾液中皮醇含量较低，因而对检测设备和技术要求更高。目前皮质醇的主要分析方法有放射免疫法网、酶联免疫法、气相色谱质谱法冋和液相色谱质谱法。酶联免疫法放射免疫发容易出现交叉污染和假阳性反应叫气相色谱质谱法需要对样品进行衍化生后进样，前处理操作复杂费时且容易出现样品损失。近年来也有液相色谱质谱法检测唾液皮质醇的研究2T,但前处理较为复杂且成本较高。我们简化了样品前处理方法，缩短了样品上机测定的时间，利用外标法定量建立了用液相色谱质谱检测唾液中皮质醇的测定方法

一、材料与方法

1.仪器与试剂:超高效液相色谱仪（UPLC,I-class,美国waters公司），三重四级杆串联质谱仪（XevoTQ-XS,美国waters公司），氮气发生器（GENIUSNM32LA,英国PEAK公司），真空浓缩仪（Concentratorplus,德国eppendotf公司），十万分之一电子分析天平（Quintix35-1CN,瑞士赛托里斯公司）,涡旋振荡器（Vortex-2,美国scientificindustries公司），台式高速离心机（TG16-WS,中国湘仪公司），纯水仪（ELGALahWater,英国），皮质醇标准品（Dr）,甲醇（LC-MS级,MERK）,乙月青（LC-MS级,MERK）,甲酸（LC-MS级,TCI）、氯化钠（优级纯、TCI）离心管(15ml,带清洁棉塞)。

2.样品的采集和保存：受试者在早上起床后立即将离心管盖打开，取出棉塞;用清水漱口后，将棉塞放入口中充分咀嚼1~3min,直到感觉棉塞浸满唾液;将棉塞放回离心管，拧紧管盖，于-20°C保存。

3.样品预处理:将唾液收集管在3000r/mim下离心10min,弃去吸水棉。准确移取0.5ml唾液样品于2ml离心管中，向离心管中加入0.5g氯化钠和1ml乙月青，涡旋震荡3min。震荡完成后将样品在转速15000r/min,离心10min。准确移取上层提取溶液800|xl至另一洁净离心管内，并将离心管置于真空浓缩仪中浓缩至干，然后向离心管中加入200M初始流动相.涡旋震荡3min后将样品转移至进样小瓶中准备进样分析。

4.液相色谱条件：色谱柱:watersHSST3(2.1x100mm,1.8|±m),色谱柱温度50T,样品温度8T,进样体积2口,流动相A：0.05%甲酸水溶液.流动相B:乙睛，流速0.4ml/min.进样量2洗脱方式为梯度洗脱,流动相梯度程序见表1。

二、结果与讨论

1.样品前处理方法的确定：本次研究采用先向样品中加入过量氯化钠然后分别用乙月青和甲醇进行萃取的前处理方式，加入过量氯化钠的目的是降低皮质醇在样品中的溶解度，同时可以实现乙睛与水的分层：实验发现即使加入过量氯化钠.甲醇也不能与水分层，而乙睛可以分层，同时乙睛可以起到沉淀蛋白，降低基质效应的作用：因而实验最终选定乙睛为萃取溶剂

2.液相色谱条件的确定：为得到较好的峰形和合适的出峰时间,试验对比了等度洗脱与梯度洗脱的效果.结果显示，在试验液相色谱条件下进行质谱MRM监测时目标化合物在1.77min出峰且样品内所有成分在4min全部洗脱完毕，目标化合物峰行良好，其他内源性化合物不干扰皮质醇的测定见图1,图2。