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柱前衍生RP-HPLC法测定仙鹤草中氨基酸含量

大C-会员头像-www.bzwz.com标准物质网 大C 0 394 2021-04-21
【摘要】采用柱前衍生RP-HPLC法对仙鹤草中游离及水解氨基酸进行测定。以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂。以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂;色谱柱采用UltimateAminoAcid氨基酸柱(4.6minx250mm,5m);流动相A为8O%(体积分数)的乙腈一水溶液,流动相B为7%(体积分数)的乙腈一CH3COONa溶液(pH=6.5);检测波长为254nm。21种氨基酸在0.0019Ixmol/mL2.700p.mol/mL内呈良好的线性关系(R2>0.9990)。21种游离氨基酸平均回收率在95.84%~l11.34%之间,RSD在1.23%~2.54%之间(n=6);水解氨基酸平均回收率在90.79%一l11.23%之间,RSD在1.29%~2.21%之间(n=6)。柱前衍生RP-HPLC法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,适合仙鹤草中氨基酸含量测定。
  • 仙鹤草(AgrimoniapilosaLedeb.)为蔷薇科多年生草本植物龙牙草的全草,异名脱力草、马鞭草、龙牙草、石打穿等,始载于《滇南草本》。

    现代药理研究证实,仙鹤草具有收敛止血、截疽、止痢、解毒等作用,主要用于咳血、吐血、崩漏下血、疟疾、血痢、脱力劳伤、痈肿疮毒、阴痒带下等。仙鹤草资源丰富,化学成分多样,主要含有仙鹤草素、仙鹤草内酯、鞣质、甾醇、有机酸、酚性成分、皂苷、仙鹤草酚(A、B、C、D)、vc、V等,但对仙鹤草中的游离氨基酸和水解氨基酸鲜见相关报道。氨基酸是构成蛋白质的基本单位,蛋白质是构成生命的基本物质,也是非常重要的营养物质。

    蛋白质能够促进机体的新陈代谢,调节机体的生理机能,供应机体的所需能量,但是人体需要的22种氨基酸中,有9种氨基酸是机体不能自身合成或者合成量不够的,这就需要从食物药物中获取。氨基酸测定方法有化学法、分光光度法、色谱法(纸色谱、薄层色谱、气相色谱和液相色谱)、电化学法等,其中HPLC法应用最为广泛。

    本试验为仙鹤草建立了一种方法,先用HC1进行水解再用HPLC法测定游离氨基酸和水解氨基酸的含量,为仙鹤草在药品和食品上的开发利用提供参考。

    1材料

    1.1原料

    仙鹤草采于吉林农业大学院内,经吉林农业大学张连学教授鉴定为仙鹤草(AgrimoniapilosaLdb.)的全草。

    1.2仪器

    FW一100型高速万能粉碎机:北京中兴伟业仪器有限公司;220V/50Hz超声波清洗机:江苏省昆山市超声仪有限公司;2XZ一4型旋片式真空泵:上海博一泵业制造有限公司;HH一6B数显恒温水浴锅:上海明桥精密科学仪器有限公司;CXTH一3000HPLC色谱仪:北京创新通恒科技有限公司。

    1.3试剂

    21种氨基酸对照品(I>98%):国药集团化学试剂有限公司;三乙胺:天津市光复精细化工研究所;除乙腈为色谱纯,其余试剂均为国产分析纯。

    2方法与结果

    2.1HPLC条件

    UltimateAminoAcid氨基酸色谱柱(51~m,4.6Bin~250mm),柱温为35℃,uV检测波长是254nm。流动相A是80%(体积分数)的乙腈水溶液,B是7%(体积分数)的乙腈CH,COONa溶液(pH=6.5)。流速为1.0mL/min。梯度洗脱:0—11min,0%~6.5%A;l1min~13.9min,6.5%-11%A;13.9min-17min,l1%一13.4%A;17min-29rain,13.4%-30%A;29rain~32min,30%~70%A;32min-35min,70%一100%A;35min~42min,100%A;42min-45min,l00%一0%A;45min~60min.0%A。

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