仙鹤草始见于《图经本草》，属于蔷薇科植物龙芽草AgrimoniapilosaLedeb的地上部分，其味苦，性平，归肝、脾、肺三经。仙鹤草具有抗凝、抗肿瘤和降血糖等作用。原发性肝癌在中国的发病率达12.9%，位居我国癌症发病率第3位。本实验研究仙鹤草水提液对人肝癌HepG2细胞增殖的影响。

1材料与方法

1材料

细胞HepG2细胞株，由浙江中医药大学中药代谢实验室提供。药品仙鹤草，购自浙江中医药大学中医门诊部，经浙江中医药大学基础医学院李荣群副教授鉴定为正品，浓缩液浓度4mg·mL－1;五氟尿嘧啶(5－FU)，批号:1126A024，含量99%，北京Solarbio公司生产。仪器酶标仪，上海伯乐生命医学产品有限公司产品;TE2000－S荧光倒置显微镜，日本尼康公司产品;FC500流式细胞仪，美国Beckman公司产品。

2实验方法

2.1药物制备

取仙鹤草500g，10倍水浸泡30min，常规方法制备。干燥得仙鹤草水提液6.25g。取仙鹤草水提液冻干粉，以蒸馏水为溶剂配制药物浓度为4mg·mL－1的母液，置于4℃保存备用。

2.2细胞培养

HepG2细胞接种于含10%灭活胎牛血清的DMEM高糖培养液中，37℃下、在5%CO2饱和湿度下进行培养。当细胞贴壁生长85%左右，用0.25%胰蛋白酶消化传代，每隔1d换液。取对数生长期细胞进行下一步实验。

2.3分组与给药

将细胞分为6组:空白组、对照组、仙鹤草水提液－C、－D、－E、－F组。空白组加入正常培养液0.1mL，对照组加入质量浓度为50μg·mL－1的5－FU培养液0.1mL，仙鹤草水提液－C、－D、－E、－F组别加入含不同质量浓度(1.00，0.75，0.50，0.25mg·mL－1)仙鹤草水提液的培养液0.1mL。

2.4以MTT检测细胞增殖

取对数生长期的细胞并制备成0.5×104cell·mL－1单细胞悬液，取0.1mL接种于96孔培养板中培养，待细胞贴壁后，分组与给药。按照文献方法操作。于490nm波长下测定各孔光密度(OD)值，并计算抑制率。据此结果得出，在48h最佳仙鹤草作用浓度为1mg·mL－1，即仙鹤草水提液－C组。以下实验只考察48h情况。

2.5以流式细胞仪检测细胞凋亡

取对数生长期的细胞，将细胞以1×106cell·mL－1接种于6孔板中，每孔1mL。将细胞分为3组:空白组、对照组、仙鹤草水提液－C组。各组处置方法同“2.3”。按照文献方法操作。以流式细胞仪检测细胞凋亡情况。