牛奶在人们日常生活中消耗量逐渐增加，其安全问题也越来越受到关注。近年来，抗生素作为抗菌药和促生长剂被广泛应用于养殖业，抗生素的乱用会造成牛奶中抗生素的残留，通过食物链可进入人体，带来健康风险。同时，过量抗生素还会诱导产生抗生素抗性基因，加速抗生素耐药性的传播⋯。目前，用于牛奶中抗生素残留检测的方法有很多，主要包括微生物检测法(如纸片法、氯化三苯基四氮唑法、管碟法等)、免疫分析法(如放射免疫法、荧光免疫法、酶联免疫法等)、适配体传感器检测法、色谱及联用法、光谱法等。文章主要针对色谱及光谱技术在牛奶中抗生素检测中的应用及进展进行讨论。

1牛奶中抗生素最大残留限量

牛奶中抗生素残留对人体有许多不良反应，如引起过敏反应、造成人体肠道菌群紊乱，长期积累甚至会导致癌症的发生。因此，世界粮农组织、世界卫生组织、美国食品药品监督管理局、欧盟等都对牛奶及其他动物源性食品中抗生素的最大允许残留量做了严格规定。我国农业部的235号公告也对常见抗生素残留限量进行规定。牛奶中常见的抗生素主要包括四环素类、磺胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、B一内酰胺类、喹诺酮类、氯霉素类、林可酰胺类等。我国和欧盟对牛奶中抗生素最大残留量规定的标准见表1。

2色谱及联用法

色谱及色谱一质谱联用法是目前应用最广泛的牛奶中抗生素残留分析技术，其选择性强、灵敏度高、重复性好。由于牛奶基质复杂，存在较多的脂肪和蛋白质，为获得准确的分析结果，需要对样品进行复杂的分离、提纯等前处理步骤。

2．1高效液相色谱法高效液相色谱法以液体为流动相，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂等流动相泵人色谱柱，在柱内各成分被分离后进人检测器(如紫外、荧光、二极管阵列检测器等)进行检测。S．Shariati等_2使用高效液相色谱一紫外检测法(HPLC-UV法)分析牛奶中的四环素、土霉素和强力霉素，样品通过中空纤维液相微萃取富集，使用反相色谱柱分离，以草酸溶液一乙腈一甲醇为流动相梯度洗脱，3种四环素在10min内完成分离，检测限为0．5—1．0L。N．Phonkeng等利用高效液相色谱一荧光检测法(HPLC-FLC法)分析牛奶中的氟喹诺酮类抗生素，样品用乙腈一甲酸混合液、HLB小柱进行蛋白质沉淀预处理后，在280nm激发波长和450nm发射波长下检测。高效液相色谱一光二极管阵列检测器(I-IPLC-PDA)被用于分析牛奶中4种四环素类抗生素残留，检出限为5．95～18．85g／L，回收率为88．26％一107．98％。

2．2色谱一质谱联用法色谱一质谱联用法是将色谱强大的分离功能和质谱准确的鉴别功能结合起来，能很好地分析痕量水平的抗生素残留，且可实现多种抗生素成分的同时测定，其中以气相色谱、液相色谱与质谱的联用技术应用最多。例如气相色谱一质谱法(GC—Ms法)被用于测定牛奶中氯霉素残留量，样品用硅胶小柱净化除去脂溶性干扰，检出限达到1．2ng／mL，但该方法在测定氯霉素时需要衍生化，前处理较复杂。

与GC-MS法相比，液相色谱～质谱联用法更广泛地应用于牛奶中抗生素残留的检测，其精确度高，前处理操作相对简单。C．Nebot等利用高效液相色谱一串联质谱法(HPLC-MS／MS法)结合固相萃取前处理，测定牛奶中9种磺胺类抗生素，大多数抗生素的定量限为12．5～25．0g／L，回收率约为89％。有研究者建立了HPLC-MS／MS法检测牛奶中5种喹诺酮类药物，并成功用于中国市场上22种不同品牌牛奶的分析。HPLC-MS／MS法还被用于i贝4定牛奶和奶粉中6种大环内酯类药物(螺旋霉素、吡利霉素、竹桃霉素、替米卡星、红霉素和泰乐菌素)，在牛奶和奶粉中的检测限分别为1～8g／L，回收率为81．5％96．1％F。