积雪草苷(Asiaticoside，AS)是积雪草提取物三萜皂苷类成分之一，为积雪草重要的药理活性成分，现今已经成为评价积雪草质量的标志。近年来研究发现，积雪草苷因其药理作用的多样性，在抗抑郁、抗氧化、神经元保护等方面效果良好，并且在对抗肿瘤，急性肺损伤等疾病方面也取得一定疗效。本文旨在建立快速、灵敏、稳定的高效液相色谱(highperformanceliquidchromatography，HPLC)法，为积雪草苷血药浓度的测定提供依据。

1材料与方法

1．1主要实验仪器

LC．2010A高效液相色谱仪，包括紫外检测器、色谱数据处理系统、CLASS—VP工作站(日本岛津公司)；Welchrom．C18柱(250mmX4．6mm，5Ixm)(上海汉邦公司)；LD．50一G．D雷蒙实验室专用超纯水机(重庆利迪实验仪器设备有限公司)。

1．2主要药品和试剂

AT原料药(广西昌洲天然产物开发有限公司，批号：090610)；AT标准品(美国Sigma公司，批号：1439605，纯度／>98．5)；内标葫芦素B(天津医药工业研究所，纯度I>99％)；乙腈(色谱纯，美国Tedia公司)；甲醇(分析纯，天津四友公司)。

1．3实验动物

选取健康Sprague—Dawley(SD)大鼠18只，雌雄各半。重量为195～205g，由重庆医科大学实验动物中心提供。

1．4溶液的配置

1．4．1标准品溶液的配制

精密称取积雪草苷对照品5．0mg于25mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，超声至完全溶解，制成0．2mg·mL的对照品溶液，置4℃冰箱保存。

1．4．2内标溶液的配制

精密称取内标葫芦素B4．0mg于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，超声至完全溶解。制成0．4mg·mL的内标溶液，置4℃冰箱保存。

1．4．3AS溶液的配制

电子天平分别称取14、42、126mgAS粉末于10mL的大豆注射油中，分别配成1．4、4．2、12．6mg·mL的溶液于37℃恒温水浴中超声15min，直至完全溶解，供大鼠低、中、高三剂量组尾静脉注射使用。

1．5分析测试系统

高效液相色谱仪配uV(紫外)检测器及色谱数据处理系统。色谱条件：Welchrom—C18柱(250ram~4．6mill，5Ixm)；流动相：水一乙腈(24：76)，流速1．0mL·min～，柱温28，在221nm波长处检测。进样品量为20L。

1．6给药方法及实验设计

根据研究证实的积雪草苷有效治疗剂量拟定给药剂量14mg·kg(低剂量组)、42mg·kg(中剂量组)和126mg·kg(高剂量组)。选取健康SD大鼠18只(早6各半)，随机分成3组(每组6各半)。禁食不禁水24h后操作。从尾给药后，于0(给药前)、1、3、5、10、20、30、60、120min用毛细管从大鼠眼底静脉丛取血0．3mL于1．5mL预先肝素化的EP管中，于4000r／min离心5min分离血浆，一20℃冰箱保存待测。