近年来，核酸与小分子如染料、药物、有毒化合物等相互作用成为研究热点，其研究目标是发现检测核酸的新型探针及在分子生物学、生物化学、诊断医学和法医鉴定学等方面的应用。利用核酸的荧光性、分子吸光性测定核酸干扰因素多，导致灵敏度低，而通过电子共振产生高强度散射的共振光散射法(Ｒesonancelightscattering，ＲLS)，因操作简单、灵敏度高、选择性好被广泛成功地应用于样品中核酸的测定。共振光散射法测定核酸一般选用三苯甲烷类染料、阳离子表面活性剂、金属离子等阳离子作为探针试剂，经研究发现阴离子染料日落黄也能作为探针测定核酸。

日落黄是一种常见的人工合成色素，其与DNA共同存在时，由于静电斥力作用，不能发生反应而引起ＲLS的增强，但添加CTMAB后会形成SY-CTMAB-DNA三元体系产生强烈的共振光散射。基于此本文建立了一种以日落黄为探针，CTMAB为增敏剂，检测限低，线性范围好的核酸测定方法。

1实验部分

1.1仪器和试剂

CaryEclpse分子荧光光谱仪(美国瓦里安公司);梅特勒-托利多AL204型电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司);梅特勒-托利多DELTA320型酸度计(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)。小牛胸腺DNA(CalfThymusDNA，ctDNA，Sigma)、鱼精DNA(HerringSperumDNA，fsDNA，Sigma)、酵母ＲNA(ＲNAfromyeast，yＲNA，Sigma);日落黄(SunsetYellow，SY，德国Dr．Her-enstorfer公司);十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB，上海国药集团化学试剂有限公司);伯瑞坦-罗宾森(Britton-Ｒobinson，BＲ)缓冲溶液:用0.04mol·L-1H3PO4、H3BO3和CH3COOH与0.2mol·L－1NaOH溶液按一定比例混合，配成不同pH的缓冲溶液，并用酸度计校正其pH;所用其他试剂均为分析纯;实验用水为超纯水。

1.2实验方法

于10mL比色管中依次加入1mLpH7.5的BＲ缓冲溶液，1mL5μg·mL－1的DNA溶液，1mL5×10－4mol·L－1的CTMAB标准溶液，1mL1×10－5mol·L－1的日落黄溶液，用超纯水稀释至刻度，摇匀。将溶液置于分子荧光光谱仪中进行同步扫描(λex=λem)，记录其共振光散射光谱(ＲLS)，并于最大散射波长532nm处测定体系的ＲLS强度I和试剂空白的ＲLS强度I₀(ΔI=I－I₀)。