内容简介

酶标分析仪的工作原理

酶标分析仪的应用及现状

酶标分析仪的使用

酶标分析仪的检定

酶标仪的工作原理

原理：利用光的吸收定律。光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光，垂直进入塑料微孔板中的待测标本。该单色光一部分被标本吸收，另一部分则透过标本照射到光电检测器上，光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号。电信号经前置放大、对数放大，模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算，最后由显示器和打印机显示结果。

光的吸收定律（朗伯-比尔定律）是光电比色分析仪的光学理论基础。内容是光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。

测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。

因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。酶标仪测量吸光度采用的是垂直光路，其特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小，不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。        

酶标仪在用单波长测定吸光度时，除受到测定干扰（样本的浊度、干扰色等）和电路干扰（包括噪音、漂移、电压等）等因素影响外，受液体表面张力的影响也很大。          

双波长测量中在参照波长下，检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。

酶标仪的应用及现状

酶标仪国内品牌：深圳雷杜、上海科华、深圳迈瑞、郑州安图、北京天石等。 酶标仪进口品牌：芬兰雷勃、美国伯乐、美国热电等

随着全面实验室自动化运动的开展、医学法规的严格要求和血站实验室必要的的检验安全需求，全自动酶标分析系统得到充分发展，全自动酶免分析系统的主要功能包括：样本稀释、样本分配、试剂分配、孵育、洗板、酶标判读、结果打印等全步骤。      

全自动酶标分析系统主要包括加样系统、温育系统、洗板机、酶标仪等。

酶标仪的性能参数举例说明，如下： 型号：           PHOMO 光源：             双LED混合冷光源（自动校准） 微孔板类型：96 (8x12), 48 (4x12) ，平底, U形底和V形底 波长范围：   400nm~ 750nm 测量通道：   8通道 测量范围：   0.000 OD– 4.500 OD 分辨率：      0.001 OD 准确性：      在1OD时，<±0.5% 线性：           在0.000- 3.500 OD时，<±0.5% 重复性：      <0.15% 测量时间：  单波长时为2 秒/96孔，双波长时为5秒/96孔 滤光片：    标准 405nm, 450nm, 492nm, 630nm，最多8个滤光片

酶标仪的使用

要正确使用酶标仪就必须对酶标仪的一些性能指标（测定波长、吸光度范围、光学系统、检测速度、震板功能等）有一定的了解。

（一）测定波长        

酶免试验最常用的两个波长450nm和492nm。除了这两个基本滤光片外，还考虑到双波长比色的需要，应有620nm或630nm或650nm和405nm波长的滤光片，其他滤光片可以根据自己的需要选择。

在ELISA测定中常用单双波长比色：“单波长”是使用一种对显色具有最大吸收的波长进行比色测定。 “双波长”则除了用对显色具最大吸收的波长进行比色测定外，同时用对特异显色不敏感的波长如630nm进行测定，酶标仪最后打印出来的吸光度则为二者之差。    630nm波长下得到的吸光度是非特异的，微板孔上如指纹、灰尘、液面张力、电路干扰等所致的吸收。    因此，在ELISA比色测定中，最好使用双波长。

（二）测定的吸光度范围        

通常酶标仪的吸光度测定范围在0～2.5之间就可以满足ELISA的测定要求，但有些仪器可以达到0～4.0的范围；对酶标仪的吸光度范围不必追求大的吸收光范围，主要看在一定的吸光度范围内的线性和精密度如何。

（三）光学系统        

酶标仪的光学系统采用的是垂直光路，多通道（通常为8或12通道，亦有单通道）检测，一般为硅光管或光导纤维，有的酶标仪还有一个参比通道（参比通道测定在开机时进行自我校准）。光学系统好与坏，主要看其仪器测定的精密度与测定通道之间的均一性有直接关系，单通道可以避免因通道不同所致的差异。

（四）检测速度        

指酶标仪完成比色测定所需要的时间。检测速度快，有利于提高检测的精密度，即避免由于在测定过程中，因测定时间不同所致的各微孔间吸光度间的差异。现在的酶标仪通常在数秒内即完成测定。

（五）震板功能      

指酶标仪在对ELISA板孔进行比色测定前对其振荡混匀，使其微孔内颜色均一。目前大部酶标仪均有震板功能，所不同的是震板方式，有的可按上下、左右或旋转等方式震板，振荡幅度有强、轻微、不震荡

酶标仪的检定

（一）酶标分析仪检定项目

1、分类    

JJG861-2007《酶标分析仪检定规程》将酶标仪分为下面三类：    

I  —— 单波长/双波长、多通道；    

II ——单波长、单通道；    

III——波长连续可调式、单通道/多通道。