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精吡氟禾草灵酶联免疫吸附分析方法研究

大C 0 328 2021-09-30

【摘要】建立了定量测定精吡氟禾草灵的间接竞争酶联免疫吸附分析方法（ｉｃ－ＥＬＩＳＡ）。将精吡氟禾草灵在碱性条件下水解制得半抗原，再将半抗原与蛋白质偶联形成抗原后免疫新西兰大白兔，获得多克隆抗体。对其进行条件优化后，得到了精吡氟禾草灵的ｉｃ－ＥＬＩＳＡ方法的标准曲线。该方法的Ｉｃ５０为０．５５３ｍｇ／Ｌ。检出限为０．００６２ｍｇ／Ｌ。方法对其他芳氧苯氧基丙酸酯类除草剂没有明显交叉反应。精吡氟禾草灵在样品中的回收率为８６．８０％～１０３．４１％，变异系数为３．９６％～１２．３２％。表明本研究建立的精吡氟禾草灵的ＥＬＩＳＡ方法符合农药残留分析的要求。

精吡氟禾草灵是芳氧苯氧丙酸酯类内吸传导型选择性茎叶处理除草剂，广泛应用于大豆、棉花、花生、油菜等多种作物防除一年生和多年生禾本科杂草，其药效高、用量少，并且具有很高的选择性，且环境降解较快。

国内外关于芳氧苯氧丙酸酯类除草剂酶联免疫分析（ＥＬＩＳＡ）技术的研究也有所报道。Ｍａａｒｇｉｔ等水解禾草灵得到半抗原，其检出限为０．０２３ｍｇ／Ｌ；Ｚｅｎｇ等通过对精喹禾灵分子结构进行了改造，所得抗体的Ｉｃ５０为０．０３４９５ｍｇ／Ｌ；Ｍｏｏｎ等水解噁唑酰草胺合成了三种不同的半抗原，得到抗体的检出限为０．０２０ｍｇ／Ｌ。

有关精吡氟禾草灵的免疫分析技术研究国内外尚未见报道。本研究通过对精吡氟禾草灵的分子结构进行改造，将精吡氟禾草灵在碱性条件下水解合成半抗原，将其用于免疫化学分析研究。

１实验部分

１．１仪器、试剂与材料

ＬＣ－ＭＳＱＤＥＣＡ液质联用仪（Ｆｉｎｉｇａｎ公司）；ＤＲＶ５００核磁共振仪（Ｂｒｕｃｋ公司）；ＤＵ８００核酸／蛋白分析仪（Ｂｅｃｋｍａｎ公司）；ＩｎｆｉｎｉｔｅＭ２００型酶标仪（Ｔｅｃａｎ公司）；Ｒ－２００旋转蒸发仪（ＢｕＣＨＩ公司）；Ａｌｌｅｇｒａ６４ＲＣｅｎｔｒｉｆｕｇｅ高速离心机（Ｂｅｃｋｍａｎ公司）。

精吡氟禾草灵原药（９２．４％，江苏扬农化工集团有限公司）；Ｎ－羟基琥珀酰亚胺（ＮＨＳ，国药集团化学试剂有限公司）；牛血清蛋白，卵清蛋白，弗氏完全佐剂，弗氏不完全佐剂，辣根过氧化物酶标记羊抗兔ＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ公司）。０．０１ｍｏｌ／ＬｐＨ＝７．４的磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）；０．０５ｍｏｌ／ＬｐＨ＝９．６的碳酸盐缓冲液（ＣＢＳ）；含０．０５％吐温－２０的ＰＢＳ洗涤液（ＰＢＳＴ）；邻苯二胺（ＯＰＤ）－Ｈ２Ｏ２底物溶液。其他试剂均为分析纯。实验用水为二次蒸馏水。试验动物：新西兰大白兔。