青霉素V(phenoxymethylpenicillin)为青霉素类抗生素，与青霉素比较，本药虽抗菌作用较弱，但耐酸，口服吸收较好，使用方便，耐受性良好，不良反应较少。为方便病人的使用开发研制了青霉素V钾咀嚼片。本文建立了LCMS／MS法测定人血浆中青霉素V的血药浓度，并用于青霉素V钾咀嚼片相对生物利用度的研究，评价其生物等效性。

1材料与方法

1．1药品与试剂

受试制剂：青霉素V钾咀嚼片，规格0．236片，批号：070801，药检报告证明试验药品合格，华北制药股份有限公司提供；参比制剂：青霉素V钾片，规格0．236g／片，批号：0610222，华北制药股份有限公司，失效期2008—09；对照品：青霉素V，批号：130490—200503；内标：氯硝西泮，批号：1227-9701，均为中国药品生物制品检定所提供。乙腈为色谱纯(Fisher化学公司，批号：063507)；乙酸胺为色谱纯(Tedia化学公司，批号：306144)；甲酸为市售分析纯；水为娃哈哈纯净水。

1．2仪器

API4000型液相色谱一三重四级杆质谱联用仪，配有电喷雾离子化源(ESI源)，Analyst1．4软件(美国ABI公司)；液相色谱仪为Shimadzu，20A系统：二元梯度泵、在线脱气机、自动进样器、柱温箱(日本Shimadzu公司)；AG一135分析天平(瑞士MettlerToledo公司)；TDL一5型离心机(上海安亭科学仪器厂)；GZ-20G一Ⅱ型离心机(上海安亭科学仪器厂)；ZH一2型混合器(天津药典标准仪器厂)。

1．3健康志愿者选择

选择男性健康志愿者20名，年龄(19．7±1．4)岁，体重(64．5±6．1)，身高(174±5)em。试验前体检及血、尿常规，心、肝、肾功能，血糖等检查均正常。受试前两周及试验期间未服用任何其他药物，受试者均无烟酒嗜好。本试验获得河北医科大学第二医院医学伦理委员会批准，试验前受试者书面签署知情同意书。

1．4试验设计与血样采集

采用两制剂双周期随机交叉实验设计。将20名受试者随机等分成2组，分别口服青霉素V钾咀嚼片(受试制剂)和青霉素V钾片(参比制剂)，2次给药问隔一周，然后进行交叉试验(在试验第二周期有1例脱落，实际完成试验人数为19名)。于服药前(0h)和服药后0．084，0．17，0．33，0．50，0．75，1，1．5，2，3，4，5，6h自上肢静脉取血3ml，注入肝素化管中，混匀后3000r·rain离心10rain，血浆样品于一20℃冰箱保存待测。