青霉素V钾具有耐酸的特性，克服了青霉素只能通过注射发挥全身或局部作用的不便和缺点，其钾盐已制成多种制剂供口服，大大方便了患者使用，增加了患者使用青霉素的顺应性。测定青霉素V钾在人体内含量的方法国内外都有报道，本实验建立了灵敏、便捷的HPLC并对其在人体内的药动学进行了实验研究。

1材料与方法

1.1仪器及药品

Waters1525高效液相色谱仪，2487双波长紫外检测器，Breeze化学工作站，XW-80A型漩涡混合器，TL-16R台式高速冷冻离心机，DHG-9140型电热恒温鼓风干燥箱，PHS-3C精密pH计，SZ-Ⅲ型自动三重纯水蒸馏器。青霉素V钾片（批号：20080501，规格：236mg每片）；青霉素V钾对照品：89.3%；甲醇：HPLC级，磷酸二氢钠：分析纯，试验用水为新鲜双蒸水。

1.2体内试验

10名男性健康志愿者，年龄22.7±2.1岁，体重67±8kg，身高172±6cm；经询问病史及心电图、肝、肾功能等检查均为正常。10例受试者均无烟酒嗜好，试验前14天及试验期间未服用任何药物。于试验前向本人说明试验目的、药物特性、临床应用范围及可能出现的不良反应，然后由本人签署知情同意书。晨起空腹单剂量口服青霉素V钾片472mg，分别于服药前及服药后的0.17、0.33、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0、6.0h取静脉血5ml，肝素抗凝，离心，分离血浆，保存于－20℃冰箱中冷冻待测。

1.3色谱条件

色谱柱：依利特SinoChromODS-BP柱（4.6mm×150mm，5µm）；流动相为甲醇-磷酸二氢钠（pH值4.5）的体积分数为7:3；流速1.0ml/min；柱温30℃；检测波长268nm；进样量20µl。

1.4血浆样品处理

取0.1ml血浆样品，精密加入0.3ml甲醇，置于漩涡混合器上混合30s，15000r/min离心10min，取上清夜20µl进行测定。

1.5血浆标准曲线制作

在空白血浆中加入不同浓度的青霉素V标准溶液适量，配制成系列浓度0.1、0.2、0.3、0.6、1.0、2.0、5.0、10.0µg/ml，按前述血浆样品处理过程分析。以青霉素V钾的峰面积（Y）为纵坐标，样品浓度（X）为横坐标求其回归方程。

1.6方法精密度和回收率

配制含青霉素V0.2、2.0、10.0µg/ml血浆标准品数份，分别于1天内每个浓度平行5份按血浆样品处理方法处理并测定，评价本法测定血浆中青霉素V含量的回收率及日内、日间相对标准差（RSD）。