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浅谈三种免疫学检测方法对呋喃唑酮代谢物的检测

大C 0 728 2021-10-17

【摘要】为了对动物源性食品中的呋喃唑酮进行快速、有效的检测，试验对检测呋喃唑酮残留的三种免疫学快速检测方法，即化学发光免疫分析法(CLEIA法)、酶联免疫分析法(ELISA法)、胶体金免疫层析法(ICA法)在检测限、检测时间等方面进行综合比较。结果表明：CLEIA法、ELISA法、ICA法对呋喃唑酮代谢物(AOZ)的检测限分别为0．01g／L、0．02L、50ng／L，CLEIA法和ELISA法添加回收试验的变异系数范围分别为小于15．0％和小于8．0％。说明三种免疫学检测方法在不同的应用环境各具优势，CLEIA法检测灵敏度高，适用于实验室痕量残留检测；ELISA法灵敏度满足限量残留检测，适用于实验室一般项目的快速检测；ICA法所用胶体金试纸条价格低廉，操作简便，无需任何仪器，适用于野外大批量样本的阳性筛选。

呋喃唑酮是人工合成的具有5一硝基呋喃结构的广谱抗菌药，对大多数革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌和原虫等病原体均有杀灭作用。在长期的试验过程中发现，硝基呋喃类抗生素具有致畸、致癌和致突变作用。2002年，我国农业部将呋喃类药物纳入动物源性食品不得检出行列。

根据目前的检测结果统计，在部分产品中仍检测到呋喃类药物残留。硝基呋喃类药物在体内迅速代谢，在组织中与细胞膜蛋白结合长期持续存留，因此在分析此类药物的残留时以分析代谢物为主。目前，常用的呋喃唑酮代谢物(AOZ)检测方法包括高效液相层析法(LC-UV法)、液相色谱一质谱联用法(LC—Ms法)、胶体金免疫层析法(ICA法)、酶联免疫分析法(ELISA法)等J。色谱方法检测结果准确、检测限低，但是前处理繁琐，需要贵重仪器设备和专业操作人员，费用较高。

ICA法和ELISA法是目前最常用的野外大规模筛查方法，其原理是基于抗原抗体反应，具有较高的特异性和灵敏度，经济简便，但在痕量检测上，这两种方法的检测限不能满足要求。本试验建立了一种基于磁微粒的呋喃唑酮化学发光免疫分析法(CLEIA法)，并与目前最常用的ICA法和ELISA法进行对比，以便我国食品企业、政府职能部门等更好地开展检测工作。

1材料

1．1样品与试剂

磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯金酸、吐温20等化学试剂；AOZ标准品、鲁米诺、辣根过氧化物酶(HRP)、四甲基联苯胺(TMB)；化学发光板、96孑L微量滴定板，购自丹麦NUNC公司；硝酸纤维膜、样品垫、结合垫；抗呋喃唑酮单克隆抗体。

1．2仪器与设备

酶标仪，购自美国BioTek公司；喷金划膜仪，购自美国BioDot公司；化学发光仪，购自北京勤邦生物技术有限公司。