目录

第一节 荧光分析法概述

第二节 荧光分析法原理

第三节 荧光检测法在食品检测中的应用

第一节 荧光分析法概述

1、光致发光（发射）：有些物质收到光照射时，除吸收某种波长的光之外还会发射出比原来所吸收光的波长更长的光，这种现象称之为光致发光，最常见的就是荧光和磷光。

2、荧光（fluorescence）:物质分子接受光子能量被激发后，从激发态的最低震动能级返回基态时发射的光。

3、荧光分析法（fluorometry）:根据物质的荧光线谱位置及其强度进行物质鉴定和含量测定的方法。

分类:原子荧光分析法和分子荧光分析法

优点：操作简介，灵敏度高，线性范围宽，精密度高，多通道检测，痕量检测

第二节 荧光分析法原理

2.1 分子荧光

2.1.1 分子荧光的产生

1、分子的电子能级与激发过程:

分子能级比原子能级复杂：

在每个分子体系中存在着电子能级，振动能级和转动能级；

在室温时，大多数分子处在电子基态的最低振动能级，当受到一定的辐射时，就会发生能级之间的跃迁。

Paull不相容原理：基态时，分子中的电子成对地填充在能量最低的各轨道中，一个给定的轨道中的两个电子，必定具有相反的自旋，自旋量子数分别问1/2和-1/2,总自旋量子数S为0，即基态没有净自旋。

电子能级的多重性——单重态和三重态

用M=2S+1表示

S为电子自旋量子数的代数和(0或1)

基态单重态:大多数分子含有偶数电子,在基态时,这些电子成对地存在于各个原子或分子轨道中,成对自旋,方向相反,电子净自旋等于零:S=1/2+(-1/2)=0,其多重性M=2S+1=1（M为磁量子数）,因此,分子是抗(反)磁性的,其能级不受外界磁场影响而分裂,称“单重态”( sigletstate; S)。

激发单重态和三重态:

激发单重态:当基态分子的一个成对电子吸收光辐射后,被激发跃迁到能量较高的轨道上,通常它的自旋方向不改变,即S=0,则激发态仍是单重态,即激发单重态

激发三重态( triplet state;T):如果电子在跃迁过程中,还伴随着自旋方向的改变,这时便具有两个自旋不配对的电子,电子净自旋不等于零而等于1:S=1/2+1/2=1,其多性:M=2S+1=3,这种受激态称为激发三重态。

激发三重态与激发单重态区别:

（1）三重态的能量稍低;

（2）电子自旋方向不同;

（3）三重态的跃迁几率非常小,仅相当于单重态→单重态过程的10-6-10-7（因为电子自旋方向的改变在光谱学上一般是禁阻的）

2. 荧光(紫外一可见荧光)的产生:

分子在室温时基本上处于电子能级的基态。当吸收紫外-可见光后,根据自旋禁阻选律,基态分子中的电子只能跃迁到激发单重态的各个不同振动转动能级,而不能直接跃迁到激发三重态的各个振动转动能级。

基态一激发态特点:吸收特定频率的辐射;量子化;跃迁一次到位;

处于激发态的分子是不稳定的,要从激发态→基态,通常通过辐射和无辐射跃迁等方式释放多余的能量而返回至基态。一般以速度最快、激发态寿命最短的途径占优势;发射荧光是其中的一条途径。

分子处于激发态后,去活化过程主要有以下六种方式：

（1）振动弛豫( vibrational relexation)处于激发态各振动能级的分子通过与溶剂分子的碰撞而将部分振动能量传递给溶剂分子,其电子则返回到同一电子激发态的最低振动能级的过程。

特点:能量是以热的形式放出,因此振动弛豫属于无辐射跃迁;只在同一电子能级内进行;振动弛豫时间约为10-12s数量级。

（2）内部能量转换( internal conversion):简称内转换,是当两个电子激发态之间的能量相差较小以致其振动能级有重叠时,受激分子常由高电子能级以无辐射方式转移至低电子能级的过程。内转换过程很容易发生。

（3）荧光发射:无论分子最初处于哪一个激发单重态,通过内转换及振动弛豫,均可返回到第一激发单重态的最低振动能级,然后再以辐射形式发射光量子而返回至基态的任一振动能级上,这时发射的光量子称为荧光。

特点:

1）由于振动弛豫和内转换损失了部分能量,所以荧光的波长总比激发光波长要长;

2）发射荧光的过程约为10-9—10-7s

3）由于电子返回基态时可以停留在基态的任一振动能级上,因此有时得到的荧光光谱有几个非常靠近的峰。通过进一步弛豫,很快都回到基态的最低振动能级。

（4）外部能量转换 (external conversion)简称外转换,是溶液中的激发态分子与溶剂分子或与其他溶质分子之间相互碰撞而失去能量,并以热能的形式释放能量的过程。

注意:外转换常发生在第一激发单重态或激发三重态的最低振动能级向基态转换的过程,因此外转换使荧光或磷光减弱或“猝灭”。

（5）体系间跨越( intersystem conversion)是处于激发态分子的电子发生自旋反转而使分子的多重性发生变化的过程。S1的最低振动能级同T1的最高振动能级重叠,则有可能发生体系间跨越(S1→T1)。分子由激发单重态跨越到激发三重态后,荧光强度减弱甚至熄灭。含有重原子如碘、溴等的分子,体系间跨越最为常见。

（6）磷光发射:经过体系间跨越的分子再通过振动弛豫降至激发三重态的最低振动能级,分子在激发三重态的最低振动能级可以存活一段时间,然后返回至基态的各个振动能级而发出光辐射,这种光称为磷光 (phosphorescence)

特点:

1)电子由S0进入T1的可能过程:(S0→T1禁阻跃迁)

S0→激发→振动弛豫→内转移→系间跨越→振动弛豫→T1;

2)发光速度很慢:10-4--10s(因为分子在三重态的寿命较长),光照停止后,可持续一段时间。

3)磷光的波长比荧光更长:因为激发三重态的能级比激发单重态的最低振动能级能量低,所以磷光辐射的能量比荧光更小。

4)在室温下很少呈现磷光:由于物质分子与溶剂分子间相互碰撞等因素的影响,处于激发三重态的分子常常通过无辐射过程失活回到基态,所以在室温下很少呈现磷光。

总之:

处于激发态的分子,可以通过上述不同途径回到基态,哪种途径的速度快,哪种途径就优先发生。

如果一发射荧光使受激分子去活化过程与其他过程相比较快,则荧光发生几率高,强度大。

如果一发射荧光使受激分子去活化过程与其他过程相比较慢,则荧光很弱或不发生。

2.1.2 荧光的激发光谱和发射光谱

荧光物质分子都具有两个特征光谱,即激发光谱( excitation spectrum)和发射光谱或称荧光光谱( fluorescencespectrum)

第二节 荧光分析法原理

1.荧光的激发光谱:将激发荧光的光源用单色器分光,连续改变激发光波长,固定荧光发射波长,测定不同波长激发光下物质溶液发射的荧光强度(F),作F- λ光谱图称激发光谱,其形状与吸收光谱相似。表示不同激发波长的辐射引起物质发射某一波长荧光的相对效率

从激发光谱图上可找到发生荧光强度最强的激发波长λex,选用λex可得到强度最大的荧光

2.荧光光谱:使激发光的λex和强度保持不变,用另一单色器将物质发射的荧光分光,记录每一波长下的F,作F-λem光谱图称为荧光光谱。

表示组分所发射各种不同波长荧光的相对强度。

激发光谱和荧光光谱可用来鉴别荧光物质,而且是选择测定波长的依据。λex与λem一般为定量分析中所选用的最灵敏的波长

3.荧光光谱的特征:

（1）斯托克斯位移( Stokes shift):荧光的发射波长总是大于激发光波长。这个现象是由斯托克斯首次观察到而得名。

原因:

1)内转换和振动弛豫过程是主要原因

2)荧光发射回到基态的各个不同振动能级,然后进一步振动弛豫,损失能量,是又一原因;

3)激发态分子与溶剂分子的相互作用,也是一个原因。

（2）荧光光谱的形状与激发光波长无关:电子跃迁到不同激发态能级,吸收不同波长的能量,产生不同吸收带,但均回到第一激发单重态的最低振动能级再跃迁回到基态,产生波长一定的荧光,只有一个发射带,而且荧光光谱与激发波长无关。

（3）荧光光谱与激发光谱的镜像关系:通常荧光发射光谱与它的吸收光谱(与激发光谱形状一样)成镜像对称关系

镜像关系的解释:蒽的激发光谱有两个峰,第一峰是由基态→S2而形成的。在高分辨的荧光图谱上可观察到第二峰是由一些明显的小峰组成的。

2.2 荧光与分子结构:

2.2.1荧光寿命和荧光效率:荧光寿命和荧光效率是物质的重要发光参数。

1.荧光寿命( fluorescence life time):是当除去激发光源后,分子的荧光强度降低到最大荧光强度的1/e所需的时间,常用τf表示。

当荧光物质受到一个极其短暂的光脉冲激发后,从激发态到基态的变化可用指数衰减定律表示:

2.荧光效率( fuorescence efficieney):又称荧光量子产率( fluorescence quantum yield),是指激发态分子发射荧光的光子数与基态分子吸收激发光的光子数之比,用фf表示。

荧光效率与激发态能量释放各过程的速率常数有关,如外转换过程速度快,不出现荧光发射, фf =0;如果没有其他去活化过程与发射荧光过程竞争,那么所有受激分子都将以荧光方式回到基态, фf =1;一般物质的荧光效率在0-1之间

例如:荧光素钠在水中фf =0.92;荧光素在水中фf =0.65;蒽在乙醇中фf=0.30;菲在乙醇中фf =0.10

2.2.2有机化合物分子结构( molecular structure)与荧光( fuorescence)的关系

1.分子产生荧光必须具备的条件

(1)具有合适的结构:强的紫外可见吸收;

(2)具有一定的荧光效率。

2.有机化合物的结构与荧光

(1)跃迁类型:π→π*跃迁的荧光效率高,系间跨越过程的速率常数小,有利于荧光的产生;

(2)共轭效应:提高共轭度有利于增加荧光效率并产生红移

(3)刚性平面结构:可降低分子振动,减少与溶剂的相互作用,故具有很强的荧光。如荧光素和酚酞有相似结构,荧光素有很强的荧光,酚酞却没有。

(4)取代基效应:芳环上有供电基团,使荧光增强。

综上所述:具有:π→π* 跃迁长的共轭结构,刚性平面以及具有供电子基团的一类化合物,有利于荧光的产生。

（三）荧光试剂:为了提高测定的灵敏度和选择性,常使弱荧光物质与某些荧光试剂作用,以得到强荧光性产物,扩大荧光分析法的应用范围。常用的荧光试剂有:

1 荧光胺 fluorescamine):能与脂肪族和芳香族伯胺形成高度荧光衍生物

2 邻苯二甲醛(OPA)

3 1-二甲氨基5-氯化磺酰萘 (dansyl-c,丹酰氯)

4 测定无机离子的荧光试剂:

2.2.3 影响荧光强度的外部因素:

1溶剂的影响:一般情况下,荧光波长随着溶剂极性的增强而长移,荧光强度也增强。

2温度的影响:荧光强度对温度变化很敏感,温度增加,外转换去活的几率增加,使荧光效率和荧光强度降低

3.溶液pH:对酸碱化合物,溶液pH的影响较大,需要严格控制;

4.荧光熄灭剂:又称荧光猝灭,是指荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子相互作用引起荧光强度降低的现象。引起荧光熄灭的物质称为荧光熄灭剂( quenching medium)

如果荧光熄灭强度与荧光熄灭剂的浓度呈线性关系,可以利用这一性质测定荧光熄灭剂的含量。

5.散射光( scattering ligh):当一束平行单色光照射在液体样品上时,大部分光线透过溶液,小部分由于光子和物质分子相碰撞,使光子的运动方向发生改变而向不同角度散射,这种光称为散射光。有两种情况:

瑞利光( Reyleigh scattering light):光子和物质分子发生弹性碰撞时,不发生能量的交换,仅使光子的运动方向发生改变,这种散射光称为瑞利光(非拉曼光)。

拉曼光( Raman scattering ligh):光子和物质分子发生非弹性碰撞时,在光子运动方向发生改变的同时,光子与物质分子发生能量的交换,光子把部分能量转移给物质分子或从物质分子获得部分能量,而发射出比入射光稍长或稍短的光,这种散射光称为拉曼光。

5.散射光( scattering ligh):当一束平行单色光照射在液体样品上时,大部分光线透过溶液,小部分由于光子和物质分子相碰撞,使光子的运动方向发生改变而向不同角度散射,这种光称为散射光。有两种情况:

瑞利光( Reyleigh scattering light):光子和物质分子发生弹性碰撞时,不发生能量的交换,仅使光子的运动方向发生改变,这种散射光称为瑞利光(非拉曼光)。

拉曼光( Raman scattering ligh):光子和物质分子发生非弹性碰撞时,在光子运动方向发生改变的同时,光子与物质分子发生能量的交换,光子把部分能量转移给物质分子或从物质分子获得部分能量,而发射出比入射光稍长或稍短的光,这种散射光称为拉曼光。

小结

1.荧光( fuorescence):物质分子接受光子能量被激发后,从激发态的最低振动能级返回基态时发射出的光

2.磷光( phosphorescence):物质分子接受光子能量被激发后,经过体系间跨越再通过振动弛豫降至激发三重态的最低振动能级后再返回基态时发射出的光。

3.分子荧光的产生:处于基态的分子,吸收紫外可见光后,电子由基态→激发单重态,激发态的分子不稳定,它通过辐射跃迁和无辐射跃迁等去活化过程释放能量而迅速返回至基态。无论处于哪一个激发单重态,通过内转换和振动弛豫均可返回至第一激发单重态的最低振动能级,然后再以辐射形式发射光量子而返回至基态,所发射的光称为荧光。

4.分子处于激发态后,去活化过程主要有以下六种方式:

(1)振动弛豫( vibrational relexation)

(2)内部能量转换( internal conversion):

(3)荧光发射:

(4)外部能量转换( external conversion)

(5)体系间跨越( intersystem conversion

(6)磷光发射

5.荧光的激发光谱和发射光谱:可用来鉴别荧光物质,并作为选择适当测定波长的依据。

6.溶液荧光光谱的特征:

(1)斯托克斯位移:荧光波长总是大于激发光波长;

(2)荧光光谱的形状与激发光波长无关;

(3)荧光光谱与激发光谱的镜像关系。

7.荧光寿命和荧光效率:是描述荧光物质的重要发光参数

8.发射荧光的物质应具备的条件:

(1)物质必须有强的紫外可见吸收;

(2)物质必须具有一定的荧光效率。

9.分子结构与荧光的关系:

(1)长共轭分子具有π→ π *跃迁的具有较强的荧光强度;

(2)刚性平面结构分子具有较强的荧光效率;

(3)共轭体系上的取代基对荧光光谱和荧光强度有很大影响。

10.影响荧光强度的外部因素

(1)温度;

(2)溶剂;

(3)pH;

(4)荧光熄灭剂

(5)散射光:尤其是拉曼光

3.1、分子荧光法在食品检测标准中的应用

产生分子荧光有两个必要条件:

1、是分子本身具有能吸收激发光的结构, 通常是共轭双键;

2、是具有较高的量子效率, 即荧光物质吸光后所发射的荧光量子数与吸收的激发光量子数的比值较大。

目前我国食品安全检验标准体系中, 获得广泛应用的分子荧光法主要包括：

荧光分光光度法，薄层色谱-荧光法，高效液相色谱-荧光法

3.1.1 荧光分光光度法

将待测基质进行充分的粉碎、提取、净化、浓缩定容后, 不经其他分离手段, 直接将样液倒入荧光检测比色皿，并以产生的荧光强度进行定量检测, 是目前现行标准中常采用的分光光度检测模式。

目前我国食品安全检测标准体系中,采用该方法进行检验的物质有伏马毒素、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素 A、噻菌灵、金属硒、腹泻型贝类毒素、抗坏血酸等, 所涉及的基质包括粮油、饲料、乳制品、水质、茶叶、果蔬等。

薄层色谱-荧光法主要应用：

目前我国食品安全检测标准体系中, 采用该方法进行检验的物质有黄曲霉毒素 M1、B1、B2、G1、G2, T-2 毒素 、玉米赤霉烯酮等, 所涉及的基质包括配合饲料、牛乳及制品、奶油及新鲜猪组织

3.1.2 薄层色谱-荧光法

薄层色谱-荧光法是在初步分离的前提下实现的一种半定量检测方法。试样经提取净化等前处理后, 点样于薄层色谱板 (thin layer chromatography, TLC)上, 同时点上检出限浓度的标准溶液作为参比。

定性依据:

①试样点与标准溶液点的迁移距离 Rf 一致;

②试样点与标准溶液点的荧光色度相同, 则可以判定试样中含有目标化合物。

定量依据:

①试样点荧光强度如果弱于标准溶液点, 则其含量低于检出限;

②如果强于标准溶液点, 则需对试样进行适度稀释, 直至强度与标准溶液点相同, 并根据稀释倍数计算 其实际浓度。

3.1.3 高效液相色谱-荧光法

将高效液相色谱与荧光检测器串联, 对待测样品进行基线分离后, 导入流通池进行荧光检测; 当前标准中所采用的色谱均为常规柱反相液相色谱。

该法是目前我国食品安全标准体系中应用最广泛的分子荧光检测方法,目前部分标准将该法作为检测的第一法, 液相色谱-串联质谱法作为第二法, 发现阳性样品后实施第二法进行结构确证。在兽药残留、人工色素、真菌毒素等检验中获得了普遍应用。

定量方面, 依靠色谱峰高或者峰面积, 采用外标法即可实现精准定量分析;为降低柱外效应, 流通池体积需与色谱柱规格相匹配, 因此光程相对于比色皿小, 灵敏度稍低于分光光度法。

定性方面, 该方法虽不能提供结构解析功能, 但其综合了保留时间和荧光波长两项指标, 前处理再结合免疫亲和层析净化后, 具有较大的可信性。

3.1.3.1 兽药残留检测

高效液相色谱-荧光法检测鲶鱼肌肉中五种氟喹诺酮类药物：环丙沙星（CIP）、沙拉沙星（SAR）、达诺沙星（DANO）、恩诺沙星（ENRO）、二氟沙星（DIF）、

三种四环素类药物：土霉素（OTC）、四环素（TC）和金霉素（CTC）

检测极限为0.15-1.5ng/g

3.1.3.2 色素染料检测

因罗丹明B对人体具有致癌作用而被禁止在食品中使用。然而，由于其成本低，一些仿冒者经常使用它来掺杂辣椒油以改善其自然颜色。然而，由于辣椒油中罗丹明B的底物复杂、粘度高，很难对其进行定量。深圳市计量质量检验研究院Guowu Yang 课题组通过深度共晶溶剂萃取和配备荧光检测器的超高效液相色谱（UPLC）测定辣椒油中的微量罗丹明B

3.1.3.3 真菌毒素检测

黄曲霉毒素是由黄曲霉菌、寄生曲霉菌等真菌产生的毒性次生代谢产物, 目前已分离鉴定出衍生物 20 多种, 其中黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2、广泛存在于花生、玉米、麦类、稻谷、牧草等农产品中, B1、B2 通过饲料进入食物链, 在奶牛体内代谢为黄曲霉毒素 M1、M2、并最终进入乳汁。

目前标准中采用的检测方法为: 试样经溶解、离心、过滤后, 通过免疫亲和柱, 其特异性抗体与存在的黄曲霉毒素抗原键合, 行成抗体-抗原复合体, 甲醇-乙腈混合溶液洗脱定容后, 进入液相色谱-荧光检测系统; 激发波长 360 nm, 发射波长 420 nm; 为增强灵敏度通常采用碘或者过溴化溴化吡啶柱后衍生, 检出限最低可达 0.001μg/kg。该方法可测样品基质覆盖牛乳及乳制品、粮食、饲料、植物油脂、酱油、食醋等。

玉米赤霉烯酮主要污染玉米、小麦、大米、大麦、小米和燕麦等谷物, 其中玉米的阳性检出率为 45%。食用含赤霉病麦面粉制作的各种面食可引起中枢神经系统的中毒症状, 如恶心、头痛、神智抑郁等[35]。

目前标准中采用的检测方法为: 试样经乙腈/水混合液提取, 玉米赤霉烯酮免疫亲和柱净化, 其特异性抗体与存在的抗原键合, 行成抗体-抗原复合体, PBS 缓冲溶液洗脱定容后, 进入液相色谱-荧光检测系统; 激发波长274 nm, 发射波长 440 nm, 检出限最低可达 2 μg/kg。该方法可测样品基质覆盖饲料、粮食和粮食制品、食用油、酒类、酱油、醋、酱及酱制品等。

3.1.3.3 真菌毒素检测

桔霉素是由红曲霉分泌出的一种真菌毒素, 其主要作用的靶器官是肾脏,它不仅可以致畸、导致肿瘤的发生, 而且可以诱发突变。

目前检验检疫行业标准采取的检测方法是: 试样经甲醇/水混合液提取, 免疫亲和柱净化, 其特异性抗体与存在的抗原键合, 行成抗体-抗原复合体, 甲醇/三氟乙酸水溶液洗脱定容后, OPA 柱前衍生, 进入液相色谱-荧光检测系统; 激发波长 331 nm, 发射波长 500 nm; 检出限最低可达 0.03 mg/kg。

河豚毒素是鲀鱼类及其他生物体内含有的一种生物碱, 曾一度被认为是自然界中毒性最强的非蛋白类毒素, 中毒后缺乏有效的解救措施。河鲀毒素的化学性质稳定, 一般烹调手段难以破坏。

目前国家标准采取的检测方法是: 试样经酸性甲醇提取, 离心后过 C18 固相萃取柱,1%乙酸溶液洗脱, 进入液相色谱-荧光检测系统, 氢氧化钠柱后衍生; 激发波长 385 nm, 发射波长 505 nm, 检出限最低可达 50 μg/kg。

例如： 赭曲霉毒素A存在于所有类型的谷物、谷物衍生产品、豆类、干果、葡萄酒、葡萄汁、啤酒、咖啡、可可、坚果、香料、甘草、植物和肉制品中。已被国际癌症研究机构（IARC）归类为2B组，这表明其对动物和人类的肾致癌性。此外，据报道赭曲霉毒素A具有肾毒性、致畸性和免疫毒性，并与人类肾病有关。

3.2 原子荧光法在食品检测标准中的应用

原子荧光法是介于原子发射光谱和原子吸收光谱之间的光谱分析技术 。

基本原理：将含有一定浓度的待测元素原子化后, 原子蒸气经过特定频率的激发光源辐射而被激发至高能态, 而后以光辐射的形式发射出特征波长的荧光, 利用荧光波长定性, 荧光强度定量。具有灵敏度高、干扰少、进样量小、仪器简单线性范围宽等特点, 在食品安全中重金属检测方面具有广泛的应用。

3.2.1 氢化物发生-原子荧光光谱法

目前原子荧光检测中应用最广泛的手段。

砷、锑、铋、硒、碲、铅、锡和锗等 8 种元素, 可在特定条件下被还原为气态氢化物, 并且其氢化物沸点均低于 0 ℃, 可经载气带入到原子化器中并进行检测。

采用该方法进行检验的物质有硒 、砷 、铅 、锑 等, 所涉及的基质包括稻米、茶叶、水产品等各类食品

例如：水稻中砷的检测

砷及其化合物已被国际癌症组织(IARC)确认为致癌物，自然界的砷可以分为“有机砷”和“无机砷”两种存在状态，无机砷的毒性远远大于有机砷。水稻是一种比较特殊的农作物，会富集水中的砷。

采用氢化物原子荧光光度法测定13份稻米样品中的总砷和无机砷含量，结果表明：所测稻米样品中均检出总砷与无机砷，总砷含量范围为0.06-0.20mg／kg，无机砷含量范围为0.039-0.150mg／kg，无机砷占总砷的含量为50%-93.1%，无机砷含量在国家限量卫生标准以内；未冲洗大米样品中总砷含量仅为糙米的72.7%-90%，无机砷含量为糙米的62.7%-87.7%；多次冲洗的大米样品中总砷含量仅为未冲洗大米的75%-91.7%，无机砷含量为83.0%-93.6%。提高加工精度和用水淘洗均能在一定程度上降低总砷与无机砷的含量，减轻人In食鼠岳蚺身体垧铬j害

3.2.2 微波消解-原子荧光光谱法

微波消解是将样品与特定酸放入消解罐后, 加盖置于微波消解仪中, 按设定的消解程序在高温增压条件下使样品快速消化溶解。相对于传统消解方法,

优点:

①样品彻底消解且能减小易挥发元素的损失, 回收率高;

②消化快捷、空白值低、无元素损失及交叉污染, 可同时完成待测样中多元素联测;

③节约试剂, 对环境的污染小 。

在农业部标准、检验检疫行业标准均有应用, 采用该方法进行检验的物质有砷 、硒 、锑 等, 所涉及的基质包括稻米、饲料、食品接触材料等。

例如：饲料中硒的检测

微波消解 －原子荧光光谱法测定饲料中硒前处理简便所用试剂普通无毒害方法准确度好。在猪配合饲料、浓缩饲料、微量元素预混料的加标试验中回收率达到 95.2%-106%变异系数为3.5%-4.2%。本方法稳定可靠检测成本低并能较好地解决预混合饲料中高铜等过渡金属元素对硒检测的干扰.

3.2.3 液相色谱-原子荧光法

由色谱分离系统和光谱检测系统通过专用接口连接组成。色谱分离系统将被测元素的不同形态按照停留时间的不同按顺序流出, 达到按形态分离的效果; 接口装置将色谱分离出来的有机态元素转化为可进行氢化物反应的无机态; 光谱检测系统将被测试元素定量转化为可被检测的光谱信号 。以保留时间及光谱波长作为定性依据, 以光强度峰高或者峰面积作为定量依据。

优点：可进行元素形态分析,

缺点：仪器结构相对复杂, 接口处的日常维护要求比较高。该法目前在检验检疫行业标准应用较少, 主要用于动物源性食品中多种形态汞的检测等 。

例如：水产品中汞的检测

利用高效液相色谱与原子荧光光谱法联用测定水产品中３种汞化合物，即无机汞、甲基汞和乙基汞含量的方法。样品提取液过C18固相萃取柱净化，经C18色谱柱分离后，用原子荧光形态分析仪测定３种汞化合物的含量。无机汞、甲基汞和乙基汞的质量浓度在1-50 μg/L范围内与其荧光强度呈线性关系，无机汞和甲基汞的测定下限为0.03mg/kg，乙基汞的测定下限为0.04mg/kg 。方法用于水产品分析，并进行加标回收试验，方法的回收率在73.3%-87.4%之间，测定值的相对标准偏差（n＝6）3.6%-0.1%之间。