孔雀石绿(Malachitegreen，MG；化学名称：四甲基代二氨基三苯甲烷；分子式：c：，HC1N)属三苯甲烷类染料，又称碱性孔雀(石)绿、碱性绿、品绿等，是具有金属光泽的绿色结晶状固体。在工业上，曾经作为染料被用于细胞化学染色、制陶业、纺织业和皮革业。在水产养殖业上，作为杀菌剂用于预防和治疗各类水产生物的水霉病、鳃霉病和小瓜虫病等，其中治疗鱼卵和鱼体水霉病的效果较好，鱼类在打捞过程中，鱼体易受伤而被真菌感染，孔雀石绿可有效控制真菌。孔雀石绿化学性质不稳定，多以草酸盐的形式存在，在进入动物机体后，通过生物转化，被还原成脂溶性的隐性孔雀石绿(Leuco．malachitegreen，LMG；分子式：C23H26N2)，并在组织中蓄积。

隐性孔雀石绿又称无色孔雀石绿，在其分子结构式中，连接三个苯基的碳是单键，而孔雀石绿连接三个苯基的碳原子是通过双键连接，因此，隐性孔雀石绿化学性质相对稳定，但其毒性较孔雀石绿更强，具有高毒性、高残留和致畸、致癌、致突变的危害。鉴于孔雀石绿及其主要代谢产物一隐性孔雀石绿的危害，美国以及欧盟许多国家都将孔雀石绿列为水产养殖禁用药物，我国也于2002年5月将其列为水产养殖中的禁用药物(农业部公告193号)，但由于孔雀石绿杀菌效果好且价格低廉，近年来，水产品中孔雀石绿被检出的事件也时有发生，为有效保证水产品的质量安全以及人体的健康，对水产品中孔雀石绿及其代谢产物隐孔雀石绿残留的检测方法的研究是必要的。水产品中孔雀石绿检测的前处理方法主要分两步：第一步是使用乙腈及其他溶剂提取，第二步是用固相萃取柱(SPE)净化。

目前，人工养殖鱼类都可能被非法添加的孔雀石绿污染，隐性孔雀石绿积累在水产品组织中，它的去除很大程度上依赖于脂肪的含量。我国国家标准GB／T20361—20064水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色谱荧光检测法》在样品前处理过程中加入硼氢化钾，将水产品中残留的孔雀石绿全部还原成隐性孔雀石绿，再采用荧光检测器进行定量检测。此方法的检出限及回收率均较好，但样品前处理过程需要经过溶剂反复萃取、离心、震荡、固相萃取、干燥等多个步骤，过程繁琐，导致孔雀石绿回收率不稳定。因此，国内许多学者对于孔雀石绿的提取及净化方法进行了改进，简化了一些非关键步骤，提高了样品的加标回收率。

孔雀石绿在水产品体内可被代谢为隐性孔雀石绿，所以鱼体内同时残留孔雀石绿以及隐性孔雀石绿。隐性孔雀石绿肉眼不可见，水溶液显无色，但隐性孔雀石绿具有荧光特性，因此可用荧光分光光度计或者高效液相色谱的荧光检测器测定。将紫外检测器和荧光检测器串联起来使用，可同时检测孔雀石绿和隐性孔雀石绿残留量。综上所述，水产品中孔雀石绿及其代谢产物残留的检测方法研究可以采用高效液相色谱法，但要建立简单有效、自动化程度高的前处理方法，减化样品前处理中提取和净化步骤，提高检测结果的准确性、降低检测方法的检出限。作者在其他研究成果的基础上，对水产品中孑雀石绿及其代谢产物一隐性孔雀石绿进行前处理方法的优化和液相色谱一紫外／荧光同时检测进行了探讨，提供一种准确有效的水产品中孔雀石绿残留的检测方法。

1试验材料与方法

1．1试剂与仪器

孔雀石绿和隐性孔雀石绿标准品；乙腈；乙酸铵、硼氢化钾均为分析纯；PRS柱和酸性氧化铝柱；超纯水(Milli—Q制备)。