肺炎克雷伯菌是目前院内感染和社区获得性感染的常见病原菌。β-内酰胺类药物是临床常用的抗生素，占抗生素使用总量一半以上。随着三代头孢菌素等广谱β-内酰胺类抗菌药物的广泛应用，β-内酰胺类抗菌药物耐药现象日益增多。肺炎克雷伯菌对广谱β-内酰胺类药物耐药最主要的耐药机制是产β-内酰胺酶（β-lactamases），其中以超广谱β-内酰胺酶（extended-spectrumβ-lactamases，ESBLs）受到最为广泛的重视。

为了解广州地区肺炎克雷伯菌耐药情况和产β-内酰胺酶基因型分布情况及变化趋势，本研究对广东省中医院耐三代头孢菌素肺炎克雷伯菌进行了β-内酰胺类药物耐药谱系检测、耐药基因型分析和耐药分子流行病学调查，为耐药性控制和药物合理使用提供理论依据。

1材料与方法

1．1试验菌株

2009年2月至2011年12月于广东省中医院分离鉴定67株耐三代头孢菌素类抗生素的肺炎克雷伯菌。菌株采集自住院和门诊患者送检的标本，包括痰、中段尿、血液、脑脊液、胸水、腹水、伤口分泌物等。菌株鉴定结合了菌落形态特征、染色镜检、生化鉴定、16SrDNA序列分析和VITEK32微生物自动鉴定系统等方法。药敏质控菌ATCC25922（敏感株）、ATCC35218（产β-内酰胺酶株）购自杭州微生物有限责任公司；试验菌株由中山医学院热带病防治研究教育部重点实验室保存。

1．2主要试剂和设备

抗菌药物、药敏纸片和培养基购自Oxoid公司；ESBLs表型筛选实验的药敏纸片购自美国BD公司；DL-1000bpDNAladder、Taq酶、dNTP和常规化学试剂购自大连宝生物工程有限公司；PCR引物由广州立菲有限公司合成；PFGEmarker购自美国NEB公司；脉冲场电泳仪（CHEFMapperXA）购自美国Bio-Rad公司。

1．3药敏试验

采用琼脂平板二倍稀释法对67株肺炎克雷伯菌进行β-内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类和复方新诺明等4大类18种抗菌药物进行药物敏感性检测。药敏结果判定参照美国临床及试验标准协会（CLSI）2012年标准。