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肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因与插入序列连锁检测分析

大C 0 340 2021-11-02

【摘要】目的调查肺炎克雷伯菌的耐药性以及插入序列与B一内酰胺酶基因可能存在的关系。方法收集医院2011年1月一2012年3月19株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌，采用16SrDNA扩增与测序后确认菌种，采用聚合酶链反应(PCR)法分析A～D类等4类共22种内酰胺酶基因与插入序列(ISKpn6、ISKpn7)，并作了p_内酰胺酶基因与插入序列连锁检测。结果19株肺炎克雷伯菌均检出6丁EM和blaKPC型8一内酰胺酶基因，并且blaKPC与ISKpn6连锁检测均呈阳性。结论检出blaKPC型内酰胺酶基因并有可能高表达，是该组菌株对内酰胺类药物耐药的主要原因。

自2010年以来，国内已有不少耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药机制研究报道。其耐药机制为产blaKPC型l3一内酰胺酶、产b／a／MP-4型金属p一内酰胺酶合并膜孔蛋白OmpK36缺失、同时产blaDHA型与6zTEM型B一内酰胺酶合并膜孑L蛋白编码基因缺失。笔者从住院患者分离到19株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌，进行了A～D类等4类共22种j3～内酰胺酶基因与插入序列(ISKpn6、ISK—pn7)检测，并作了J3一内酰胺酶基因与插入序列连锁检测，以探讨插入序列与J3一内酰胺酶基因可能存在的关系，现报道如下。

1材料与方法

1．1菌株来源及菌种鉴定

19株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌均为2011年1月一2012年3月分离自医院住院患者，其中分离自痰液17株、尿液2株，无重复菌株。采用法国生物梅里埃公司VITEK-一2Compact全自动细菌分析仪初步鉴定菌种，并作通用引物16SrDNA扩增与测序，扩增与测序引物序列为P1：5一GAGTTTGATCCTGGCTCAG-3；P2：5一AcGGcTAccTTGTTAcGAcTT一3。16SrDNA扩增与测序试剂盒由无锡市克隆遗传技术研究所提供。

1．2药敏试验

药敏试验采用K—B纸片法，M—H琼脂和药敏纸片均为英国Oxoid公司产品，并根据2010年CLSI的标准进行抗菌药物敏感性判断。

1．3细菌DNA制备与基因检测

细菌DNA制备为蛋白酶K消化法。基因检测有8一内酰胺酶基因和插入序列(ISKpn6、ISKpn7)，检测均为PCR法。试剂盒以及阳性对照DNA均由无锡市克隆遗传技术研究所提供，PCR引物序列见表1。