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耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因调查

大C 0 304 2021-11-02

【摘要】目的调查耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CＲKP)临床分离株β－内酰胺酶基因携带情况，分析该菌株临床耐药性。方法分别收集2所医院临床分离的CＲKP菌株各20株，检测40种β－内酰胺类酶基因携带情况;对blaKPC型β－内酰胺酶基因与插入序列(ISKpn6)进行连锁检测。结果两所医院菌株药敏结果相同，但β－内酰胺类酶基因检出率存在差异。CＲKP临床分离菌株均检出blaTEM与blaKPCβ－内酰胺酶基因，blaKPC－ISKpn6连锁检测结果均为阳性。此外其中1所医院还检出blaCTX－M－1群、blaLAP、blaDHA群、blaOXA－1群基因。结论CＲKP临床分离株携带的β－内酰胺类酶基因以blaTEM和blaKPC基因型为主，不同医院存在差异。提示应依据药敏试验结果选择临床抗菌药物。

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CＲKP)是医院感染常见菌，近年来呈全球性播散趋势，我国也不断有分离到该菌的报道。CＲKP菌的表型与基因型显示该类菌呈多重耐药性，往往对一线抗菌药物已不敏感。本研究通过检测CＲKP临床分离株的β－内酰胺酶基因携带情况，调查该菌耐药性情况，为临床用药选择提供参考。现将结果报告如下。

1材料与方法

1．1菌株来源

自2014年1月至2016年1月，从溧阳市人民医院(A医院，二级甲等综合医院)与日照市中心医院(B医院，二级甲等综合医院)各收集20株CＲKP菌。剔除同一患者同一部位的重复菌株。采用VITEK2全自动微生物生化鉴定仪作菌种鉴定。

1．2药敏试验

采用VITEK微生物药敏仪和K－B纸片扩散法检测抗菌药物耐药性。

1．3细菌处理

将CＲKP菌株室温复苏后，接种于普通培养基培养18～24h。挑单个菌落放入200μl蛋白酶K(200ng/ml)溶液中，用55℃水浴消化细菌菌体蛋白2h。然后采用95℃水浴蛋白酶K灭活10min，离心取上清液作为DNA模板液，－20℃保存备用。

1．4基因检测

全部基因检测均为PCＲ法。采用无锡市克隆遗传技术研究所提供的试剂盒，并按说明书操作。检测项目见表1。