高迁移率族蛋白B1(highmobilitygroupbox1，HMGB1)是一种炎症介质，在胞外环境中，介导炎症反应和参与组织损伤过程。在肝脏损伤中，炎症因子刺激可以产生HMGB1，并且促进单核、巨噬细胞产生IL－1β、IL－18等炎症因子，进而导致肝损伤。有研究表明HMGB1的表达主要受JAK2/STAT3信号通路调控。柴胡皂苷d(SSd)已被证实具有保肝作用，但其机制尚未完全阐明，因此本研究拟将SSd的保肝作用与HMGB1作一关联研究以阐释SSd的保肝机制。

1材料与仪器

1．1实验药物及制备

柴胡皂苷d购自中国药物生物制品检定所，四氯化碳及橄榄油购自国药集团化学试剂有限公司。5%CCl4油剂按CCl4与橄榄油1:20配制，现用现配。柴胡皂苷d用DMSO溶解配制成20mg/ml原液，使用前按相应浓度稀释。

1．2主要试剂和仪器

试剂HMGB1抗体(SantaCruz公司)、JAK2、p－JAK2、STAT3及p－STAT3抗体(CellSignalingtechnology公司)、辣根酶标记山羊抗鼠、兔IgG(cellsignalingtechnology公司)、β－actin抗体(cellsignalingtechnology公司)、ＲP－PCＲ试剂盒(takara公司)、总ＲNA提取试剂(Trizo1)，HMGB1、IL－1β、IL－18引物由上海生工生物科技有限公司合成，ELISA试剂盒购自上海西唐生物科技有限公司。主要实验仪器:电泳仪(Bio－rad)、电动匀浆机(上海净信科技有限公司)、离心机(Healforce)、实时定量PCＲ仪(Bio－radCFX96)、凝胶成像系统(Bio－rad，ChemiDocTMXＲS+)、荧光酶标仪(Thermo公司)等。

1．3实验动物及分组

雄性清洁级ICＲ小鼠50只，18～22g，购自上海实验动物中心，清洁级动物房饲养，恒温(25±2)℃，人工光照，明暗各12h，自由饮水。实验动物按性别、体重随机分成5组:(1)急性肝损伤组(ALI组):5%CCl4腹腔注射制备急性肝损伤小鼠模型;(2)柴胡皂苷d干预组(SSd组):于造模前24h及1h腹腔注射SSd(1．0mg/kg，1．5mg/kg，2．0mg/kg);(3)正常对照组(ctr组):在相应的时间点腹腔注射等量生理盐水或橄榄油。各组小鼠分别于24h后，用10g/L的戊巴比妥纳麻醉后，经心采血，3500r/min离心10min后将血清分装保存－70℃待检测，并且留取肝组织。一部分小鼠肝组织使用40g/L甲醇固定，用以HE染色，另一部分保存至－70℃用于肝组织mＲNA和蛋白的检测。