溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis,UC)属于炎症性肠病（inflammatoryboweldisease,IBD），是以遗传易感为基础，免疫、环境和肠粘膜屏障功能等共同作用的慢性非特异性疾病。近年来，UC的发病率逐年上升，平均每年递增2.4%～18.1%。研究表明，UC反复发作会增加结肠癌的发病风险，但是UC的发病机制复杂，目前尚无有效的治疗方法，被世界卫生组织列为难治疾病之一。

维生素D（vitaminD，VD）的传统作用主要是调节钙磷平衡和参与骨代谢，近年的研究显示VD在固有免疫和适应性免疫等方面也发挥重要作用。目前认为，VD主要通过抗感染和调节免疫应答对UC发挥作用，包括维持肠道菌群平衡和肠上皮的屏障功能等。谭倍等研究表明UC组患者血清25-(OH)D3水平较正常组明显降低，且与疾病严重程度呈负相关。Dai等研究表明1,25-(OH)2D3可以通过抑制中性粒细胞浸润，减轻大鼠UC的炎症。VD主要通过其活性形式1,25-(OH)2D3发挥作用，在肝脏25-羟化酶的作用下形成25-(OH)D3，再经过肾小管近端1-α羟化酶的作用生成1,25-(OH)2D3。

抗坏血酸（vitaminC，VC）除具有抗氧化的作用外，还参与免疫应答，是羟化酶的辅助因子，在VD羟化为其活性形式的过程中扮演重要角色。但是灵长类动物、豚鼠和硬骨鱼类等自身不能合成VC，需要通过食物摄入才能满足机体需要。综上，UC发病率逐年上升，严重影响生存质量，且现有的治疗主要以缓解症状为主，复发率高。UC是自身免疫性疾病，VD3和VC均参与免疫应答，且VC是VD3羟化过程中羟化酶的辅助因子，所以本实验旨在探讨VD3联合VC对豚鼠UC的改善作用，进而为临床UC治疗提供依据。

1材料与方法

1.1试剂与仪器

维生素D3、抗坏血酸（北京索莱宝）；葡聚糖硫酸钠（dextransulfatesodium,DSS）Mr：36000～50000（美国MPBiomedicals）；25-(OH)D3、1,25-(OH)2D3、CRP、IL-6和NF-κBELISA试剂盒（上海BIOSWAMP）；酶标仪(美国Bio-Rad)；高效液相色谱仪（美国Agilent-1200)；5415C型高速台式离心机（德国Eppendorf）；显微镜（日本OlYMPUs）；其余试剂均为国产色谱纯。

1.2动物及分组

40只雄性Dunkin-Hartley豚鼠（北京海淀兴旺实验动物养殖场），体质量（350±20）g，按体质量随机分为5组，各组均进食缺乏VD和VC的特殊饲料（北京科澳协力饲料），饲料所含VD和VC的含量分别用高效液相色谱法、2,4-二硝基苯肼法进行检测，结果证实该饲料为缺乏饲料。采用改良的豚鼠灌胃方法给予各组相应剂量的VD3和VC：正常组[N，120mgVC＋2.8μgVD3/（kg·d）]、模型组[M，120mgVC＋2.8μgVD3/（kg·d）]、高VC低VD组[HCLD，240mgVC＋1.4μgVD3/（kg·d）]、中VC低VD组[MCLD，120mgVC＋1.4μgVD3/（kg·d）]和低VC低VD组[LCLD，8mgVC＋1.4μgVD3/（kg·d）]，每组8只。VC和VD3的灌胃剂量依据预实验结果和Hasselholt等[9]研究确定。

1.3VD3联合VC干预和豚鼠UC造模

适应性喂养2w后，进行灌胃干预。将2mgVD3先溶于2ml无水乙醇中作为母液，再用PBS逐级梯度稀释，VC用蒸馏水进行梯度稀释。7w后，除N组外，其他4组全部饮用3%DSS溶液3d。造模期间，灌胃情况不变，观察体质量变化、进食情况、精神状态和粪便性状。