褪黑素(melatonin)又称脑白金或松果体素,化学名称为N-乙酰基-5-甲氧基色胺(N-acetyl-5-methoxytryptamine),是一种广泛存在于动植物及微生物体内的内源性吲哚类激素。国内外相关文献报道,褪黑素具有抑制排卵、保护心脑血管、防止脑炎病毒感染并且降低感染后的死亡率、提高免疫力、提高细胞抗氧化能力以及预防和治疗癌症等保健功能。褪黑素在体内含量极少,以pg(1×10-12g)水平存在,中年以后体内褪黑素的分泌逐渐减少,有必要适量补充以改善人体内分泌系统的功能,延缓衰老、调节免疫功能、改善睡眠质量等。

目前中国卫生部已经批准了多种以褪黑素为主要成分的保健品,为了达到更好的保健效果,在一些保健食品中,除了主成分褪黑素以外,还添加了维生素B6。维生素B6(VitaminB6)又称吡哆素,化学名称是6-甲基-5-羟基-3,4吡啶二甲醇盐酸盐(6-methyl-5-hydroxyl-3,4-pyridinedimethanolhydrochloride),参与近百种酶反应以及相关蛋白质的代谢分解,是辅酶和激素的重要成分之一,与多数氨基酸代谢有关,对维持体内生理、生命活动(比如钠钾平衡),维持胰岛素、促进毛发生长、参与制造红细胞、调节体液具有积极作用.但是维生素B6不足或过量都会引起不良反应。测定保健品中褪黑素和维生素B6的含量,比单独测定褪黑素或维生素B6的含量更有价值。

目前已报道的方法中大部分只能单独检测褪黑素或维生素B6的含量。检测褪黑素的方法主要包括荧光法、放射免疫法(RIA)、高效液相色谱法(HPLC)、液质联用等;检测维生素B6的方法主要包括高效液相色谱法、液质联用等。能够同时准确定量检测褪黑素和维生素B6的报道很少,已报道的检测方法均存在检测灵敏度偏低的缺陷。

本实验利用RF-10Axl荧光检测器具有自动转换激发光与发射光波长的优势,在不同时间段,分别选用褪黑素和维生素B6的最佳激发和发射波长,建立了双波长-HPLC-荧光法,在单一流动相、单流速、等度洗脱条件下,同时快速、准确、高灵敏的检测保健品中褪黑素和维生素B6的含量。建立的分析方法可用于褪黑素保健品的含量检测与分析以及质量控制,分析结果可为用药的选择提供参考。

1实验部分

1.1仪器与试剂

LC-10ATVP高效液相色谱仪、RF-10Axl荧光检测器、CLASS-VP工作站(日本岛津公司)、Milli-QIntegratel5超纯水系统(法国密理博公司);RF-5301PC荧光分光光度计(日本岛津公司);TGL-16G离心机(上海安亭科学仪器厂);AUW120D十万分之一电子分析天平(日本岛津公司).维生素B6标准品，褪黑素标准品，褪黑素保健品(含维生素B6,批号:20170101-09);甲醇、乙腈为色谱纯，实验用水均为Milli-Q超纯水(18.2MΩ·cm)。

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