北方伟业计量集团有限公司
1 .定点突变的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶,其特征在于:所述定点突变的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶由基因序列为由SEQ ID NO .1编码的野生型L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶分别经过其氨基酸第115、116、148、188或152位饱和定点突变而产生的突变体。
2.如权利要求1所述的定点突变的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶,其特征在于:所述其氨基酸第115、116、148、188或152位饱和定点突变而产生的突变体,包括L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶的突变体Y152W、突变体Y152Q、突变体Y152N、突变体P188Y、突变体T115A、突变体S116A、突变体I148A。
3.如权利要求1或2所述的定点突变的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶,其特征在于:所述由SEQ ID NO .1编码的野生型L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶来源于大肠杆菌MG1655菌株。
4.DNA分子,其特征在于:所述DNA分子编码权利要求2所述的定点突变的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶。
5.质粒载体,其特征在于:所述质粒载体装载了权利要求4所述的DNA分子。
6.如权利要求5所述的质粒载体,其特征在于:所述质粒载体为在pET-28a载体上装载了权利要求4所述的DNA分子。
7 .权利要求1~3中任一所述的定点突变的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶在催化合成稀有糖D-山梨糖中的应用。
8.权利要求1~3任一所述的定点突变的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶的制备方法,其特征在于:包括,构建突变株重组质粒:将野生型L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶基因片段连接到质粒载体上,得到野生型L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶基因重组质粒,以所述野生型L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶基因重组质粒为模版,对L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶基因编码氨基酸分别进行第115、116、148、188或152位氨基酸饱和定点突变,分别得到突变株重组质粒;突变株表达:将所述突变株重组质粒转化大肠杆菌,挑选单菌落接种,IPTG 16℃诱导表达定点突变的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶。
9.如权利要求8所述的制备方法,其特征在于:还包括,蛋白纯化:将经过所述突变株表达的定点突变的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶进行纯化。
10.如权利要求8或9所述的制备方法,其特征在于:所述质粒载体为pET-28a载体,所述突变株重组质粒包括pET28a-rhaDT115A、pET28a-rhaDS116A、pET28a-rhaDI148A、pET28arhaDP188Y、pET28a-rhaDY152W、pET28a-rhaDY152Q、pET28a-rhaDY152N,所述将突变株重组质粒转化大肠杆菌,为转化大肠杆菌BL21菌株。
声明:本文所用图片、文字来源《食品科学》,版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系删除。
下载文档到电脑,使用更方便
300 积分
通话对您免费,请放心接听
温馨提示:
1.手机直接输入,座机前请加区号 如13803766220,010-58103678
2.我们将根据您提供的电话号码,立即回电,请注意接听
3.因为您是被叫方,通话对您免费,请放心接听