牙列缺失后，定植于牙齿表面的细菌因丧失栖息场所而发生一定程度的改变。有研究表明，全部牙齿丧失会改变口腔细菌的类别和数量。以往观点认为，定植于天然牙表面的牙周致病菌，如牙龈卟啉单胞菌、伴放线放线杆菌等，会随着牙列缺失而消失。但有学者通过分子杂交法发现，个别牙周致病菌依旧生长在佩戴义齿者的口腔内。牙列缺失后，咀嚼功能大大降低，对唾液腺刺激功能亦显著下降，唾液分泌及流量的减少会影响口腔细菌定植，进而影响口腔菌群的组成。然而，对无牙颌患者口腔菌群组成的研究目前仍鲜有报道。

焦磷酸测序技术(pyrosequencing)应用广泛，涉及古生物学、海洋生物学、人类学以及癌症、传染病等多个研究领域。焦磷酸测序技术所获得的基因片段大小约200bp，在细菌微生态研究中，可针对细菌16SrＲNA(核糖体ＲNA)基因序列的可变区进行分析，是分析口腔菌群物种丰富度的有效方法之一。本研究拟采用高通量的焦磷酸测序技术，对11例无牙颌患者口腔菌群的群落结构进行解析，综合、全面地探究其口腔菌群组成。

1材料和方法

1．1研究对象

收集2009年1月至2010年2月在上海第九人民医院口腔修复科就诊的11例健康无牙颌患者，年龄60～65岁。牙列缺失6个月暂未修复，口腔粘膜健康、无厚重舌苔;3个月内无抗菌素使用史;排除口腔异味、呼吸系统疾病、消化系统疾病、实质性脏器损害以及糖尿病、嗜烟酒史。实验对象知情并签署知情同意书。

1．2实验材料与设备

棉试子基因组DNA试剂盒(Tiangen，上海)，击打器(ScientificIndustries，美国)，ND-1000紫外分光光度计(NanoDrop，Thermo，美国)，UVGIS-2008凝胶成像系统(天能，上海)，454LifeScienceGSFLX测序仪(国家基因组南方中心，上海)。

1．3实验方法

1．3．1唾液标本收集

收集餐后2h的全唾液。无菌双蒸水漱口3次后取约3mL唾液于Eppendorf管中。同时取1mL无菌双蒸水于Eppendorf管中作为对照。

1．3．2粘膜菌斑标本收集

收集餐后2h的口腔粘膜菌斑。无菌双蒸水漱口3次后，无菌棉球隔离唾液，无菌棉拭子擦拭口底/舌腹、舌背、唇颊前庭、硬腭/牙槽嵴顶处粘膜，收集粘膜菌斑，每个位点反复擦拭10次以保证菌量，置于Eppendorf管中。同时取一个无菌棉拭子置于Eppendorf管中作为空白对照。

1．3．3样本保存

所有样本收集后立即－80℃冻存。

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