香蕉枯萎病又叫巴拿马病、黄叶病，是破坏维管束导致香蕉植株死亡的毁灭性病害。它是典型的土传性病害，在香蕉(Musaspp．)的整个生长期内都有可能发生．其病原菌为尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusariumoxysporumf．sp．cubense，FOC)，根据不同的鉴别寄主，香蕉枯萎病菌可划分为4个生理小种。其中4号小种(FOC4)能侵染几乎所有的香蕉品种，给香蕉产业带来的威胁最大。香蕉枯萎病菌致病因子的研究一直是研究热点。毒性因子分子机制研究对弄清寄主与病原物的互作机制有重要意义。董章勇等对多个细胞壁降解酶的研究表明其在FOC4的致病中起重要作用。

植物细胞壁是寄主与病原真菌相互作用的重要场所，在植物病原真菌侵入寄主过程中起主要屏障作用。半乳聚糖在初生细胞壁中具有重要作用，他们与细胞壁中的其他结构成分相互作用，其中，β－1，6－半乳聚糖酶(β－1，6－galactanase)在生物中广泛存在．Sakamoto等对尖孢镰刀菌β－1，6－半乳聚糖酶进行了研究，表明该酶可水解植物的半乳糖苷产生β－1，6－半乳二聚糖．Villa-Ｒivera研究表明当培养基中的葡萄糖用阿拉伯半乳聚糖、木聚糖或植物细胞壁替代时，菜豆炭疽病菌(Colletotrichumlindemuthianum)致病菌株内切－β－1，6－半乳聚糖酶基因(ebg)表达量显著提高，而非致病菌株中该基因表达量没有变化。

本研究拟纯化香蕉枯萎病菌4号小种β－1，6－半乳聚糖酶，并通过质谱方法对其进行鉴定，同时，根据鉴定结果进一步对其基因进行克隆，为深入研究该酶的功能打下基础。

1材料与方法

1.1供试菌株

香蕉枯萎病菌4号小种(FOC4)为华南农业大学植物病理生理学研究室保存菌种。低温保存的菌株经活化，接种在PDA平板上，25℃培养7d。

1.2菌丝培养

用基础液体培养基(KCl0.2g，FeSO40.01g，KH2PO40.4g，MgSO4·7H2O0.2g，ZnSO40.01g，NH4NO31gddH2O1000mL，最后用HCl和KOH调pH5.0)并以1%柑桔果胶作为碳源来培养FOC4菌丝体。菌丝25℃恒温振荡(110rpm)培养7d后，4层纱布过滤，用双蒸水洗涤4次，于－20℃冰箱保存备用。

1.3蛋白纯化

收集5000mL培养液，4℃，10000g离心15min，上清液用Amicon8400超滤浓缩系统(内含PM－10膜)和10kDa超滤离心管先后浓缩，得到粗酶液约10mL。于－20℃冰箱保存备。

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