“皮革奶”是指为了提高蛋白质含量而添加了皮革水解蛋白粉等禁用物质的鲜乳或乳制品的俗称，这类皮革水解蛋白粉多来自皮革厂制作衣服、皮鞋的下脚料，其含有的六价铬等有毒有害物质，严重影响人体健康甚至生命安全，所以乳及乳制品中禁止添加皮革水解蛋白。现在对皮革奶的鉴定方法主要是检测乳制品中是否含有羟脯氨酸，它作为动物胶原蛋白中特有成分而存在，并且其含量高达10%以上，而乳蛋白、大豆蛋白等植物蛋白不含此成分，因此，可以利用检测样品水解后是否含有羟脯氨酸来鉴定乳制品中是否添加了皮革水解蛋白。

目前检测羟脯氨酸的方法主要有比色法、高效液相法以及氨基酸自动分析法，其中比色法因检测成本低、检测速度快而应用最为普遍，基于实现快速、便捷、现场检测等方面的考虑，本文研究了比色法检测皮革奶中羟脯氨酸含量的快速检测技术。一般氨基酸的水解时间都在十几小时以上，所以检测方法的速度主要取决于前处理时间。如何优化实验条件缩短前处理水解时间以实现快速检测是本方法研究的难点。本研究结果表明，在保证精密度和准确度的前提下，经优化后的快速水解方法可以将一般需要十几个小时的工作缩减至15min，大大减少了样品前处理时间，提高了检测速度，为鉴定乳制品中是否掺入动物水解蛋白提供了一种快速高效的样品前处理方法。

1实验部分

1．1仪器

BSA224S－CW分析天平(赛多利斯科学仪器有限公司);Delta320pH酸度计(梅特勒－托利多仪器公司);UV－1801紫外可见分光光度计(北京瑞利分析仪器公司);HH－6数显恒温水浴锅(国华电器有限公司);DHG－914385－Ⅲ电热恒温鼓风干燥箱(上海新苗医疗器械制造有限公司)。

1．2试剂

实验中所用的试剂均为分析纯，水为超纯水;硫酸溶液:将浓硫酸(ρ=1．84g/mL)用蒸馏水稀释到浓度为9mol/L的硫酸溶液;缓冲溶液(pH值=6．8):分别准确称取26．0g一水柠檬酸，14．0g氢氧化钠，78．0g三水乙酸钠，用500mL水溶解上述试剂并转入1L的容量瓶中，加入250mL的正丙醇，用水定容;氯胺T:准确称取1．41g三水·N－氯－对甲苯磺酰胺钠盐(氯胺T)，加入100mL缓冲溶液溶解。临用前配置;显色剂:称取10．0g对二甲基苯甲醛，用35mL高氯酸溶液［60%(质量分数)］溶解，缓慢加入65mL异丙醇。临用前配置;羟脯氨酸标准储备液:称取50mg4－羟基－α－吡咯甲酸(羟脯氨酸)于100mL容量瓶，用水溶解，加入一滴硫酸溶液，用水定容，此标准储备液浓度为500μg/mL;标准使用液:将羟脯氨酸标准储备液稀释5倍，得到浓度为100μg/mL的标准使用液。

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