动物水解蛋白是由动物皮革及其制品下脚料等水解得到的蛋白质，长期误食，可导致关节疏松、肿大，造成重金属中毒。2009年卫生部公布《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单(第二批)》中明确规定：乳及乳制品、含乳饮料中不得添加水解动物蛋白。然而部分违规企业为降低生产成本，经常会在鲜奶、奶粉等乳品中掺入动物水解蛋白，以期提高乳品中蛋白质含量，这严重影响了乳品加工企业产品质量，威胁消费者人身健康，尤其是婴幼儿、孕产妇、病人等特殊人群。

L一羟脯氨酸是动物水解蛋白中特征性氨基酸，约占胶原蛋白氨基酸总量的10％，而乳蛋白质中不含L一羟脯氨酸。为此，L一羟脯氨酸已作为检测乳及乳制品中是否非法掺人动物水解蛋白的重要标示物。目前，国内外对L一羟脯氨酸的检测方法主要有分光光度法圆、液相色谱法、氨基酸分析仪法嗍、毛细管电泳一激光诱导荧光检法四等，而这几种方法存在样品前处理复杂，特异性、灵敏度、准确度较差等缺点；而液相色谱一质谱法是通过液相色谱将待测样品中的有机物分离，再利用质谱对分开的有机物逐个的分析，得到有机物分子量、结构和浓度等信息，显著提高了检测方法的准确度、灵敏度。但目前关于超高效液相色谱一串联质谱法(UPLC—Ms／Ms)测定乳制品中L一羟脯氨酸含量的相关研究较少。

本文以乳制品为研究对象，探索超高效液相色谱一串联质谱法测定乳制品中L一羟脯氨酸含量的分析方法，为乳制品行政监督部门、检测机构、乳制品加工企业提供实际的检测方法参考。

1材料与方法

1．1仪器与试剂

超高效液相色谱一串联四极杆质谱仪(WatersAc—quityUPLCQuattroPremierXE)：美国沃特世公司；电子分析天平(xs一205型)：赛多利斯北京有限公司；超纯水器(Milli—Q型)：美国Millipore公司；有机微孔滤膜(0．22I．tm)：岛津企业管理(中国)6-限公司；固相萃取装置(DG一24B型)：美国Supelco公司。L一羟脯氨酸标准溶液(1000Ixg／mL)：准确称取L一羟脯氨酸标准品100mg(精确至0．1mg)，用0．01mol／L盐酸溶解并定容至100mL，一4℃以下避光保存。奶粉、酸奶、鲜奶：购自当地超市。所用试剂除特别标注外均为分析纯试剂，水为超纯水。L一羟脯氨酸标准物质(L—Hydroxyproline，C5H9NO3，CAS：51—35—4)，纯度I>99．5％：购自美国SIGMA公司；乙腈、甲醇、正己烷(色谱纯)：德国默克公司；氮气、氩气(纯度≥99．99％)：张家口市宣化燕山气体有限公司；HLB固相萃取小柱(200mg／3mL)：美国Waters公司。

1．2仪器工作条件

1．2．1色谱条件

ACQUITYUPLCBEHCl8(2．1mmx150mm，1．7Ixm)色谱柱；流动相A：乙腈；流动相B：0．1％甲酸水溶液；流速：0．2mL／min；柱温：30℃；梯度洗脱程序见表1。

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