植物在其生长过程中会受到许多不利因素的影响，当植物遇到干旱、低温、高盐等不利环境时，其生长发育和作物产量都会受到影响。为了适应逆境，植物会在短时间内在体内合成一些渗透调节物质，如甘露醇、胆碱、脯氨酸等来维持细胞形状，保护酶的活性和蛋白的结构，使代谢功能稳定。在这些渗透调节物质中，以脯氨酸分布最为广泛。

1脯氨酸

1．1脯氨酸理化性质

脯氨酸(Pro)，别名D一吡咯烷一2一羧酸，是植物蛋白质的组分之一，并可以游离状态广泛存在于植物体中。脯氨酸是组成蛋白质的常见20种氨基酸中唯一的亚氨基酸，它的特殊结构使其具有高度水溶性和两紊陛等，并且明显影响了脯氨酸残基附近多肽链的空间走向。常温下为白色结晶或结晶性粉末或无色针状结晶，含一个结晶水。脯氨酸从整个分子结构来看是极性分子，但属于非极性氨基酸，这是因为氨基酸极性的判断根据为侧链的性质而非整个氨基酸分子。它的特殊结构使其极易溶于水，是水溶性最大的氨基酸。

1．2脯氨酸测定方法及存在问题

1．2．1脯氨酸测定方法

常见方法有酸性茚三酮显色法和高效液相色谱HPLC法

①目前测定植物组织脯氨酸含量常用方法酸性茚三酮显色法。该方法首先采用3％磺基水杨酸提取植物组织内游离脯氨酸，然后在酸性条件下，游离脯氨酸和茚三酮加热煮沸，生成稳定的红色缩合物。该产物在520rim有一最大吸收峰，其色度与含量正相关，可用甲苯充分萃取反应产生的红色产物用于比色测定，最后在标准曲线上查出游离脯氨酸的含量。酸性茚三酮显色法是测定脯氨酸含量的主要方法，该法简单易行，但对植物造成了破坏，无法进行持续研究，而且只能测得部分组织总的脯氨酸含量。

②高效液相色谱HPLC法可用于对微透析液进行痕量脯氨酸的检测，该方法灵敏度高、分离效果好、重复性高，但是实验成本高而且操作较复杂。

1．2．2反应条件优化

①已有文献表明，在4℃低温避光处，酸性茚三酮可以稳定保存1—3d。因此实验时经常现配现用，极为不便。而且不同的文献对于酸性茚三酮和样品提取液在沸水中反应时间的规定也不一样。但通常认为，当茚三酮的浓度达10mg·mL～，同时被测样品中脯氨酸的含量10txg／mL以下时，能够保证反应的充分进行。职明星_4等通过改变脯氨酸浓度、显色反应时间、脯氨酸保存温度等一系列实验条件对反应结果进行比较，对脯氨酸含量的测定方法做出改进：即配置的酸性茚三酮的浓度为25mg／mL，此时酸性茚三酮可在一20和4~C暗条件下至少可以保存35d，它与同体积脯氨酸充分反应的最大浓度为1561xg·mL～，当样品提取液的浓度大于1001xg／rnL时，需适当稀释。酸性茚三酮与脯氨酸的显色反应需要沸水浴至少30min，此时测得的OD值最为理想。

②在使用甲苯萃取红色缩合物时，会出现萃取层浑浊，下层乳化的现象，使得比色的吸光度值增大而且不稳定。这种现象产生的主要原因是样品液不清澈、样品液浓度过大、萃取温度过低等。为了更准确的进行红色缩合物的比色测定，通常将样品液过滤或离心、对样品液进行稀释，或者使用物理化学法来消除乳化现象。

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