目录

一、菌落总数

二、总大肠菌群

（一）菌落总数

1.菌落总数的含义与检测意义

菌落总数：水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48 h后，所得1 mL水样所含菌落的总数。

检测意义：用来说明被检水样的安全性和微生物污染程度。被检水样中，菌落总数数值越大，表示微生物污染程度越严重，越有可能存在病原微生物，但无法得知污染的来源。

2.培养基与试剂

1、营养琼脂 成分： A  蛋白胨10 g B  牛肉膏3 g C  氯化钠5 g D  琼脂10 g~20 g E  蒸馏水1000 mL。

制法: 将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，分装于玻璃容器中(如果含杂质较多的琼脂时，应先过滤)（纱布，筛子都可以），经103.43 kPa (121℃，15 lb)灭菌20 min，储存于冷暗处备用。

3.仪器

1、高压蒸汽灭菌器。 2、干热灭菌箱。 3、培养箱36℃±1℃。 4、电炉。 5、天平。 6、冰箱。 7、放大镜或菌落计数器。 8、pH计或精密pH试纸。 9、灭菌试管。 10、平皿(直径9 cm)。 11、刻度吸管、采样瓶等。

4.检测步骤

1、接种

1.1生活饮用水

以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL充分混匀（混匀方法）的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15 mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。 每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

备注：生活饮用水只需做一个梯度。

1.2水源水

1.2.1  以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9 mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1：10稀释液。

1.2.2  吸取1∶10的稀释液1 mL注入盛有9 mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1∶100稀释液。按同法依次稀释成1∶1 000，1: 10000稀释液等备用。如此递增稀释一次，必须更换一支1 mL灭菌吸管。

1.2.3  用灭菌吸管取未稀释的水样和2个~3个适宜稀释度的水样1 mL，分别注入灭菌平皿内。以下操作同生活饮用水的检验步骤。

备注：水源水必须做原液。

2、培养

待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36℃±1℃培养箱内 培养48 h。 培养完成后进行菌落计数，即为水样1 mL中的菌落总数。

备注：培养皿理论不能叠放8个（原因及实际操作）

3、菌落基数及报告

根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查MPN(most probable number，最可能数)检索表，报告每100 mL水样中的总大肠菌群最可能数(MPN)值。 稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数。 如所有乳糖发酵管均阴性时，可报告总大肠菌群未检出。

3.1 首先选择平均菌落数在30~300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告。

3.2 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30~-300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数。 若大于2则报告其中稀释度较小的菌落总数。 若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数。

3.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告。

3.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。

3.5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则应以最接近30或30 0的平均菌落数乘以稀释倍数报告。

3.6 若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以未检出报告。

3.7 如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可计"报告，而应在稀释度最大的平板上，任意数其中2个平板1 cm’中的菌落数，除2求出每平方厘米内平均菌落数，乘以皿底面积63.6 cm'，再乘其稀释倍数作报告。

3.8 菌落计数的报告:菌落数在100以内时按实有数将告。大于100时。采用两位有效数字。在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示

（二）总大肠菌群

一、总大肠菌群的含义与检测意义

二、培养基与试剂

三、仪器

四、检验步骤

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