棉酚(gossyp01)是一种天然黄色多酚羟基双萘醛类化合物。主要存在于锦葵科植物棉花的根、茎和种子中。目前棉酚制剂主要有3种：醋酸棉酚、精制棉酚及甲酸棉酚。棉酚最初作为男性避孕药广泛运用于l临床。而近年来研究表明，醋酸棉酚(gossypolaceticacid，GAA)具有很显著的抗肿瘤活性，对多种肿瘤细胞系如宫颈癌、结肠癌、淋巴癌等产生抑制肿瘤细胞增殖并引起DNA损伤。抗肿瘤药物可以引起DNA损伤，其中，DNA双链断裂(doublestrandbreak，DSB)是最严重的，常常导致染色体畸变和细胞死亡。

本课题组的前期研究成果也证实了醋酸棉酚能够诱导人粘液表皮样癌MEC一1细胞DNA双链断裂罔。宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤。据2012年报道．全球女性有宫颈癌52．8万病例。26．6万例死亡。尤其是发展中国家，宫颈癌发病率呈上升和年轻化趋势，占全球宫颈癌发病的80％，严重威胁着广大育龄妇女的健康和生命。人乳头瘤病毒(HPV)是宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌的病原体。是最常见的性传播全球病毒感染。本研究中根据细胞种类和感染HPV(人乳头瘤病毒)16和HPVl8的情况，分为宫颈腺癌Hela(HPVl6-／HPVl8+)、宫颈鳞癌Siha(HPVl6+／HPVl8一)和C一33A(HPVl6-／HPVl8一)嘲。本实验将不同浓度的GAA作用于这3株宫颈癌细胞，初步探讨其杀伤肿瘤细胞的DNA双链损伤机制，为GAA临床用于化学治疗宫颈癌提供实验依据。

1材料与方法

1.1材料与试剂

宫颈癌细胞系Hela、,Siha、C-33A，购自中国科学院上海生科院细胞资源中心。GAA,陕西宏达植物化工有限公司产品;DMEM,美国Gibeo公司产品;胎牛血清，兰州民海生物工程有限公司产品;MTT,美国Sigma公司产品;二甲基亚砜(DMS0),天津市德恩化学试剂有限公司产品;DAPI,美国Molecularprobes公司产品;PI,美国lsbio公司产品;鼠抗yH2AX单克隆抗体,美国UpstateTechnology公司产品;FITC标记山羊抗小鼠IgG,北京中山金桥生物技术有限公司产品,其余试剂均为国产分析纯。OlympusAX70荧光显微镜,日本Olympus公司产品;酶联免疫分析仪，美国Bio--Rad公司产品;DYY--6C型电泳仪，北京市六一仪器厂制造。

1.2方法

1.2.1细胞培养及药物配制

Hela.Siha、C-33A细胞在体积分数5%CO2、37C的孵育箱中贴壁培养。培养基为含有体积分数10%灭活胎牛血清、抗生素(100μg/L青霉素和100μg/L链霉素)的DMEM。每3~4天传代一次,取对数生长期细胞用于实验。观察终浓度为2.5、5、10、20、40、80、160μmo1/L的GAA对宫颈癌细胞Hela.Siha、C-33A的作用。以未加药物组(control)作为对照。

1.2.2MTT细胞活性测定

细胞培养同1.2.1方法，调整细胞浓度为2x108个/儿,接种至6孔板中，每孔2mL,置37C孵箱孵育。培养24h后,吸弃上清液,加人含GAA(20μumol/L)的新培养基,37C、体积分数5%CO2继续培养,在不同时间点取出。在.倒置显微镜下观察细胞形态。

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