肺癌是导致人类死亡的恶性肿瘤性疾病之一。目前针对肺癌的化疗药物众多，榄香烯注射液是从天然中草药姜科植物温郁金中提取获得的萜烯类化合物，其主要生物学活性为降低肿瘤细胞有丝分裂能力；诱导肿瘤细胞凋亡；抑制肿瘤细胞的生长。鉴于其抗瘤机制确切，近年来一直用于肺癌的治疗领域里，其单药以及联合化疗药物的协同应用得到肯定。棉酚（Ｇｏｓｓｙｐｏｌ）是一种天然黄色多酚羟基双萘醛类化合物，主要存在于锦葵科植物棉花的根、茎和种子中。

棉酚可通过多种方式和分子靶向对肿瘤细胞进行抑制增殖和（或）诱导凋亡，包括通过调低细胞周期调节蛋白Ｒｂ和细胞周期素（ｃｙｃｌｉｎ）Ｄ１蛋白的表达，抑制蛋白激酶Ｃ活性，抑制端粒酶的活性，调节多元耐药基因的表达、直接损伤线粒体抑制细胞能量代谢等。而棉酚对肺癌的作用机制目前也仅限于细胞学研究。本实验旨在进一步了解棉酚对肺癌的作用效果以及棉酚与榄香烯是否协同机制，通过采用棉酚、榄香烯单独和联合应用对Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞的抑制效应观察、比较，以期寻找治疗肺癌新的更有效的组合方案，并提供一定的临床依据。

１材料与方法

１．１药物与主要试剂

棉酚（纯度＞９８％）购买自美国西格玛（Ｓｉｇｍａ公司，圣路易斯，密苏里州，美国Ｓｉｇｍａ，ＳｔＬｏｉｕｓ，ＭＯ）；β－榄香烯（大连华立金港药业有限公司产品）；胎牛血清（杭州四季青生物工程研究所产品，生产批号：１１１１０３）；二甲基亚枫（ＤＭＳＯ；Ｓｉｇｍａ，ＳｔＬｏｉｕｓ，ＭＯ）；ＡＴＰ溶液（ＣａｙｍｅｎＣｈｅｍｉｃａｌｓ，ＳｔＬｏｕｉｓ，ＭＯ）；ＡＴＰ水平测定板（宝特公司Ｂｅｌｌｉｒｉｃａ，ＭＡ）。

１．２细胞系及培养

Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞（购于美国哈弗医学院），用１０％的热灭活胎牛血清（内含５０μ／ｍｌ青霉素／链霉素、２ｍＭＬ－谷氨酰胺）置于３７℃、５％ＣＯ２培养箱中培养，棉酚溶于二甲基亚枫（ＤＭＳＯ；Ｓｉｇｍａ，ＳｔＬｏｉｕｓ，ＭＯ）制备成棉酚混合液（１０μｇ／ｍｌ）储存在－２０℃冰箱中备用。所有细胞培养实验的最后棉酚ＤＭＳＯ溶液的浓度是０．１％。

１．３ＬＬＣ细胞培养融合

将ＬＬＣ细胞接种于９６孔培养板，放在３７℃、５％ＣＯ２的细胞培养箱中，细胞贴壁长满孔底后，更换培养基，并且每孔按照浓度梯度为１～１０μｇ／ｍｌ，分别加入β－榄香烯、棉酚混合液，每一浓度设３个复孔，另设空白对照组。作用２４ｈ。在２４ｈ末，将ＡＴＰ溶液添加在细胞中，应用ＡＴＰ水平测定板测定ＬＬＣ细胞的ＡＴＰ表达水平。分别测定单纯ＬＬＣ细胞，单纯应用棉酚；单纯应用榄香烯，对ＬＬＣ细胞ＡＴＰ表达水平的影响，实验重复３次，对ＡＴＰ数据分别进行了计算，取均值计算增殖抑制率。增殖抑制率＝（１－ＡＴＰ值药物组／ＡＴＰ值对照组）×１００％。以判断药物对肿瘤细胞生长的影响。

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