曙红 Y-藏红 T 能量转移荧光猝灭法测定亚硝酸盐

［摘要］ pH=5.0 溶液中， 在十六烷基三甲基溴化铵（CTAMB）作用下，曙红 Y-藏红 T 能发生有效的能量转移，使 藏红 T 荧光增强，亚硝酸盐的加入使藏红 T 在 577 nm 处发生荧光猝灭，其荧光猝灭程度与亚硝酸根的含量呈线性 关系，由此建立了能量转移荧光测定痕量亚硝酸盐的新方法。 亚硝酸根浓度在 1.0×10-7~5.0×10-6 mol/L 范围内与荧光 猝灭程度呈线性响应，方法检出限为 8.0×10-9 mol/L。 对 1.0×10-6 mol/L 的亚硝酸根标准溶液进行 11 次平行测定，RSD 为 3.5%。 将该体系应用于水样中亚硝酸盐的测定，结果满意。

［关键词］ 曙红 Y；藏红 T；能量转移；荧光猝灭；亚硝酸盐

亚硝酸盐广泛存在于环境中，如大气、土壤、水 体、药物等均可含有。另外还作为食品添加剂被加入 到火腿肠、午餐肉等肉制品中。亚硝酸盐通常会跟胺 类、酰胺类反应生成 N-亚硝基化合物，而此类物质 被确定为公认的致癌物。因此，测定亚硝酸盐对于环 境监测和食品检测具有实际的意义。 亚硝酸根的测 定方法主要有修饰电极法〔1-3〕 、催化动力学光度法〔4-7〕 、 荧光分光光度法〔8-9〕 、化学发光法〔10-11〕 、质谱法〔12-14〕 、 离子色谱法〔15-18〕 和比色法〔19-21〕 等。荧光能量转移是一 个荧光分子（给体）的发射光谱与另外一个荧光分子 （受体）的吸收光谱有相当程度重叠情况下，给体借 助分子间的电偶极相互作用， 将激发态能量转移至 受体激发态的过程。这其中给体发生猝灭，受体发射 荧光。

荧光能量转移法具有灵敏度高、操作简便的优点，在药物、食品、环境物质分析、生物检测等领域大 有作为。查阅文献，能量转移荧光猝灭法测定亚硝酸 盐的报道几乎未见。 本研究发现，曙红 Y-藏红 T 构 成了一能量转移体系， 而亚硝酸盐的加入使体系的 荧光强度发生猝灭， 亚硝酸盐浓度与荧光猝灭程度 亦呈现良好线性关系， 将之应用于水样和火腿肠中 亚硝酸盐的测定，效果理想。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

亚硝酸盐标准溶液，1.0×10-2 mol/L，称量 0.069 0 g NaNO2 溶于烧杯中， 再定容至 100 mL 棕色容量瓶 中，为抑制其水解作用，加入少量碳酸钠，使用时逐 级稀释。 藏红 T 储备液，1.0×10-4 mol/L；曙红 Y 储备液，1.0×10-5 mol/L， 以上储备液使用时逐级稀释；十 二烷基苯磺酸钠溶液（SDBS），1.0×10-4 mol/L；十六 烷基三甲基溴化铵溶液（CTAMB），1.0×10-4 mol/L；十 二烷基硫酸钠溶液（SLS），1.0×10-4 mol/L；醋酸钠-醋 酸缓冲溶液，0.1 mol/L。 LS55 荧光分光光度计，美国 PE 公司；HH-4 恒 温水浴锅， 杰瑞尔电器有限公司；BS224S 型分析样 品称量天平，赛多利斯科学仪器有限公司；50 mL 具 塞式比色管。 所有化学试剂均为分析纯，试验所用二次去离子 水都经过 SG2001 超纯水系统（德国 SG 公司）处理。

1.2 试验方法

取两支 50 mL 比色管，分别依次加入 0.5 mL