重氮偶联法测定水中亚硝酸盐氮的改进

摘要：重氮偶联法作为测定亚硝酸盐氮的标准方法，因具有方法灵敏、选择性强、仪器较易获得等优点，被实验室广泛 采用，但也存在测定上限较低，适用样品范围较窄等缺点。通过将显色荆中磷酸改为盐酸，把重氮试剂含量提高到国标 法的3倍，明显提高亚硝酸盐氮的测定上限，即由原国标法上限的0．2 mg／L提高到0．6 mg／L，灵敏度与国标法接近，且 准确度和精密度良好，6组标准溶液平行测定的相对误差为1．60％，相对标准偏差为1．34％，加标回收率为96．5％一 104．9％，适用于生活污水、工业废水、地表水、养殖废水等水体的测定。

关键词：重氮偶联法；亚硝酸盐氮；分光光度法；改进方法

水体中的氨氮、亚硝酸盐氮是水产养殖环境 的主要有毒物质，亚硝酸盐氮能把血液中的血红 蛋白氧化为高铁血红蛋白，使之失去与氧结合的 能力。亚硝酸盐氮也是养殖水体主要的监测对 象‘1’3，。当水体受到生活污水、养殖废水、饲料生 产与肉类加工等工业废水中含氮有机物污染后， 在水体中产生氨氮、亚硝酸盐氮、硝酸盐氮，亚硝 酸盐氮作为水中氮循环的中间产物，是水环境监 测的重要指标¨1。

亚硝酸盐氮的测定方法有离子色谱法”。、气 相分子吸收法怕1、分光光度法"。’。离子色谱法 和气相分子吸收法简便、快速、准确、干扰较少，适用于环境水样的测定，但因需要使用专用仪器，且 仪器昂贵，不利于一般实验室和基层检测单位的 普及。在亚硝酸盐氮的测定方法中，分光光度法 因其方法灵敏、选择性强、仪器较易获得、准确性 良好而被实验室广泛采用，其方法原理：在磷酸介 质中，亚硝酸盐氮与对氨基苯磺酰胺反应，生成重 氮盐，再与N一(1一萘基)一乙二胺偶联生成红色染 料，在540 nm波长处有最大吸收。

但是该国标法 的测定上限仅为0．2 mg／L，对于亚硝酸盐氮含量 较高的水样则需稀释一定倍数甚至数次稀释才能 进行测量，使测定过程更为繁琐，增大了测定误 差，降低了测定的准确性。为克服以上缺陷，本文将亚硝酸盐氮显色剂 中的磷酸溶液改成盐酸溶液，将重氮试剂浓度提 高到原国标法的3倍，研究该方法对亚硝酸盐氮 检出上限以及灵敏度、准确度、精密度的影响，取 各类含亚硝酸盐氮污水进行加标实验，并研究干 扰因素对改进法测定的影响。

1 实验部分

1．1主要仪器 UVmini．1240紫外．可见光分光光度计 (Nichipet EX可调式移液器，日本)；电子天平。

1．2试剂及溶液配制 国标法所用试剂、溶液等配制方法参考《水和废水监测分析方法》‘9’：吸取亚硝酸盐氮标准 中间液(50 mg／L)10 mL于100 mL容量瓶中，用 水定容至标线，得到亚硝酸盐氮标准使用液1 (5 mg／L)；吸取国标法中亚硝酸盐氮中间液 (50 mg／L)10 mL于1 000 mL容量瓶中，用水定 容至标线，得到亚硝酸盐氮标准使用液2(0．5 mg／L)。 改进法试剂、溶液的配制方法：取20 mL浓盐 酸(37．5％)溶解于180 mL蒸馏水中，得体积比 为1：9的盐酸溶液；取15 g对氨基苯磺酰胺溶解 于150 mL体积比为l：9的盐酸溶液，得到混合 液；在混合液中加入0．5 g盐酸萘乙二胺，混匀并 添加蒸馏水定容至250 mL，得到改进法的亚硝酸 盐氮显色剂。

1．3实验方法

1．3．1 国标法亚硝酸盐氮标准曲线的绘制 按照国标法步骤进行实验，获得校正吸光度 后，记录数据，用最小二乘法绘制出以亚硝酸盐氮 浓度对校正吸光度的标准曲线，得出国标法校准 曲线方程、相关系数。…。。

1．3．2改进法亚硝酸盐氮标准曲线的绘制 根据邓勃的分析，在标准曲线的绘制过程中 增加实验点数，可提高标准曲线的整体稳定性， 校正曲线中央的精密度优于校正曲线两端的精 密度…。，故此实验标准曲线的绘制，从原国标法 中的6个点增加到9个点，并将实验点集中于校 准曲线的中央部分，

具体操作如下：①向具塞比 色管中分别移人0、0．5、1、2、3、4、5、6、7 mL亚硝酸盐氮标准使用液l(5 mg／L)于9支具塞比 色管中，用去离子水稀释定容至50 mL，对应浓度分别为0、0．05、0．1、0．2、0．3、0．4、0．5、0．6、 0．7 mg／L；

②向各比色管加入改良亚硝酸盐氮 显色剂1 mL，混匀，加塞静置15 min后测定， 2 h内有效；

③于分光光度计540 nm波长处，用 光程10 mm的比色皿，以去离子水为参比，测定 各浓度亚硝酸盐氮溶液的吸光度，从测得的吸 光度，减去零浓度空白比色管的吸光度后，获得 各浓度的校正吸光度；

④记录数据，用最小二乘 法绘制以亚硝酸盐氮浓度对校正吸光度的校准 曲线，得出改进法校准曲线方程、相关系数。

1．3．3 国标法和改进法测定水样的比较 取一高浓度亚硝酸盐氮水样，分别用国标法 和改进法对该水样稀释10倍、30倍、50倍、 100倍、200倍进行测定，得出相应校正吸光度，计