HPLC-ICP-MS法研 究 5种 含雄 黄 中成 药 的可 溶性 砷及 其形态

摘要：目的 采用高效液相色谱 一电感耦合等离子质谱 (HPLC—ICP-MS)联用技术分析6种不同价态砷，对雄黄及 5 种不同处方含雄 黄复方制剂 中可 溶性砷 的形 态进 行研究 。方法 可溶 性砷 分别 以不 同提 取溶剂 和 不 同提取 方法 为 37℃人工 胃液 恒温振荡 、0．16％ 盐酸溶液超声 、甲醇 水 (1：1)超声及 甲醇 一水 (1：1)快 速溶剂萃取 (ASE)等 提取样品中可溶性砷，采用 ICP—MS方法分析可溶性砷总量；HPLC．ICP—MS分析可溶性砷的形态。结果 雄黄及含雄 黄复方制剂的酸可溶 性砷 总量仅 占样 品总含砷量 的 0．12％ ～2．70％ ；不同提取溶剂可溶性砷形 态为 3价和 5价两种 已 知形态砷 ；酸可溶性 砷中 3价 和 5价砷之和与酸可溶性砷 总量 随中药复方制剂不 同而呈现不 同比例关 系。结论 雄 黄 及其复方制剂的酸可溶性砷远远小于其总含砷量 ，复方制剂中其他成分的存在可能会对可溶性砷中有毒形态溶出产生 抑制作用 。

关键词 ：高效液相色谱一电感耦合等离子质谱法 (HPLC—ICP．MS)；雄黄 ；砷 ；形 态

矿物药雄黄主要成分是四硫化四砷(As4S4)和硫化砷( AsS)，此外雄黄中还含有少量的As,O3或Asz0"。砷为剧毒元素,国际上对其有严格的限量标准[23，故雄黄安全性受到质疑。然而许多含雄黄传统中药对一些疑难杂症有特殊疗效，近年国内医学研究发现含雄黄的复方制剂或单方对于治疗血液系统疾病、恶性淋巴系统疾病甚至实体瘤有着显著效果[46]，雄黄中砷虽然有毒性但也可能是治疗的有效成分。许多研究者对含雄黄中药用量与毒性展开讨论[78]，其焦点是该类制剂中雄黄所含砷引发的毒性问题;研究结果表明，含雄黄中药制剂经口服后，其所含的砷并非全部被人体吸收[9]，说明雄黄中所含有的大量不被机体所吸收的砷是无效或无毒成分。

砷元素作用于人体，其活性和毒性与其存在形态密切相关。雄黄中主成分砷进入机体后会发生生物转化，经酶催化通过氧化还原、生物甲基化、生 物合成等过程会产生多种砷的形态，其在体内的存在形态主要包括四类:无机砷（亚砷酸盐和砷酸盐)、有机砷小分子（甲基砷酸、二甲基砷酸)、砷的有机化合物（砷甜菜碱、砷胆碱、乳酸三甲基砷、砷酯及砷糖等)、含砷的生物大分子（不同价态的砷化物与转铁白蛋白或血红蛋白的结合物)[10]。其中亚砷酸（As3*)比砷酸（(As3+）更容易与蛋白质中的疏基结合，所以毒性最大，一甲基砷酸（MMA)和二甲基砷酸（DMA)只具有中等毒性，而动植物中的砷甜菜碱和砷胆碱几乎无毒性[1。以总砷为标准，该类中药砷含有量将大大高于限量，是不客观和不合理的。

国内学者对于含雄黄中药可溶性砷总量或其形态研究逐渐增多[ 12-14，多采用模拟体内仿生提取法研究人工胃液或人工肠液中可溶性砷及其形态;但对采用其他提取溶剂进行含雄黄中药可溶性砷的研究尚未见报道。含雄黄中药成分复杂，同一处方中其他中药材不仅会影响雄黄中砷在体内的溶出,而且可能会对其中砷的价态产生影响，也可能会形成砷络合物;本实验旨在通过不同提取溶剂和提取方法的研究，采用高效液相色谱（HPLC)-电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）联用技术同时、快速分析6种砷形态，研究探讨不同提取溶剂中药雄黄及5种不同含雄黄复方制剂中可溶性砷含有量及其形态分布，为含雄黄中药的标准及其限量制订研究奠定了基础。

1实验部分

1.1仪器美国Agilent 1100高效液相色谱仪( HPLC);美国Agilent 7500Ce电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS) ;美国Millipore超纯水机( Milli-Q) ; Dionex 公司的ASE100型快速溶剂萃取 仪;美国CEM微波消解仪。

1.2试剂及试药

1.2.1试剂磷酸二氢铵、EDTA均为分析纯;超纯水:电阻率18.2 MQ/ cm;盐酸、硝酸、甲醇均购于德国Merck 公司;'Li、89Y 、4Ce、205TI调谐液购于美国Agilent 公司。

1.2.2 标准溶液砷标准溶液( 1.00 g/L)、亚砷酸根溶液标准物质〔 ( As ( lⅢ )，AsO3 = 1.011umol/g)]、砷酸根溶液标准物质[ (As( V)，AsO?=0.233 umol/g)]、一甲基砷溶液标准物质（ MMA,CH,AsO3=0.355 umol/ g )、二甲基砷溶液标准物质(DMA，CH CH,AsO, =0. 706 umol/ g)、砷胆碱溶液标准物质（AsC，C.HAsBrO =0. 374 umol/g)、砷甜菜碱溶液标准物质（AsB，CH,AsO,= 0.518umol/g)购于国家标准物质中心。

1.2.3 标准物质茶叶(地矿部物化探研究所， GBW10016 ( GSB-7)﹔金枪鱼( TUNA FISH TIS-SUE，BCR-627，Institute for Reference Materials andMeasurements )，海藻( Seaweed，T07129，TheFood and Encironment Research Agency )。

1.2.4试药雄黄药材（ Y1 );雄黄炮制品（水飞)( Y2);七味新消丸（Y3)、万灵片(Y4)、牛黄醒消丸(Y5)、牛黄抱龙片（ Y6)和牛黄消炎片(Y7)由上海雷允上药业有限公司提供。除雄黄和水飞雄黄外，将其余样品均研细后过九号筛。

2方法与结果

2.1 ICP-MS及HPLC-ICP-MS测定条件以10ug/L的'Li、 89Y 、 140Ce20TI调谐液对ICP-MS进行调谐，使”Y灵敏度达到最优，同时使As 有较高灵敏度和较低检测限;ICP-MS仪器参数:射频功率1450 W，射频电压1.79 V，载气体积流量1.10L/min，蠕动泵流速0.1 r/s，氦反应碰撞模式，测定砷总量选择全定量模式;HPLC-ICP-MS工作条