UPLC测定钩吻素子的含量及其水溶液稳定性

摘要:目的建立超高效液相色谱法测定钩吻素子的含量，并考察其水溶液在室温条件下的稳定性。方法―采用AgilentExtend-C1g(2.1 mmx100 mm，1.8 um)色谱柱，以乙腈-0.2%正丁胺水溶液(30∶70)为流动相，流速0.5 mL·min-'，检测波长256 nm，测定3个批次钩吻素子的含量，并考察钩吻素子水溶液在室温条件下稳定性。结果钩吻素子分离度良好;在10.19~112.2 ug-mL-'内线性关系良好(r=0.9997)，定量限为0.1 ug-mL ;平均回收率为100.4%(RSD=0.45%，n=9); 3个批次钩吻素子平均含量为99.97%;钩吻素子水溶液室温条件下连续7d稳定性良好。结论该方法简单易行、专属性强，准确可靠，适用于钩吻素子含量测定，且本品水溶液稳定性良好。

关键词:钩吻素子;超高效液相色谱法;含量测定;稳定性

钩吻(Gelsemium elegans Benth.)为马钱科植物胡蔓藤的全草，在我国主要分布于福建、浙江等地，是历史悠久的药用植物，也是世界著名的剧毒药物"。钩吻素子是钩吻中含量最高且毒性较低的一种蚓噪类生物碱，呈白色柱状结晶，分子式CzoH2NzO，相对分子质量为306.18。近年来的药理研究表明，钩吻素子有抗肿瘤、镇静镇痛、免疫调节、促进造血及抑制血小板聚集等多方面的作用，具有创制新型药物的潜能，但其毒性大，治疗指数低，安全范围狭窄[2。

本课题组前期工作采用高速逆流色谱等技术从本地盛产的钩吻中分离纯化获得钩吻素子单体，进而致力于其药理作用、成药性和安全性评价研究，包括理化性质、抗慢性疼痛、抗焦虑等[3-5]。药物含量准确性及稳定性是开展实验研究的基础。为有效控制药物非 临床安全性评价过程中钩吻素子的含量，本研究采用超高效液相色谱法(UPLC)测定钩吻素子的含量，进而探讨钩吻素子水溶液稳定性。

1仪器与试药 1290超高效液相色谱仪(美国Aglient公司);美国Aglient Extend-C1g色谱柱(2.1 mmx 100 mm,1.8 um);BT25S分析天平(赛多利斯);XH-C型漩涡混合器(金坛市国旺实验仪器厂);超纯水系统(PURELAB flex)。 钩吻素子对照品(含量:99.0%，批号:KM201305)和3个批次钩吻素子样品(批号:KM201305，KM201308，KM201310)均由福建医科大学药学院提供;乙腈为色谱纯;其他试剂为分析纯;水为超纯水。

方法与结果[6-7]2.1色谱条件 色谱柱:Aglient Extend-C18色谱柱(2.1 mm×100 mm，1.8 um);流动相:乙腈-0.2%正丁胺水溶液(30∶70);流速:0.5 mL-minT1;检测波长:256 nm;柱温:25 ℃;进样量:5 uL。

2.2溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取钩吻素子50.0 mg 置于5 mL量瓶中，用生理盐水溶解并稀释至刻度，摇匀，0.22 um微孔滤膜过滤，即得10 mg:mL'的对照品母液。

2.2.2供试品溶液的制备分别精密称取3批不同批号的钩吻素子1.0 mg，按“2.2.1”项下方法制备1.0 mg mL-1供试品溶液。 2.2.3阴性对照品溶液的制备取生理盐水溶液，按“2.2.1”项下方法制得阴性对照品溶液。

2.3专属性试验

2.3.1溶剂干扰试验分别精密吸取钩吻素子对照品溶液和阴性对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别重复进样6针。结果见图1A，阴性对照品对主峰的测定无干扰，主峰峰面积 RSD 为0.05%。