一、氨基酸混合溶液标准溶液的制备

1.实验仪器与试剂

实验中使用的仪器为氨基酸分析仪(L-8800,Hitachi)。氨基酸纯度标准物质由中国计量科学研究院化学所(原国家标准物质研究中心)提供。实验中所使用的水经Millipore纯水器制备,盐酸(北京化学试剂研究所)为分析纯,经过重蒸处理后使用。本实验中所使用的其他化学试剂如柠檬酸钠、柠檬酸、氯化钠等均为分析纯,分别购自Sigma公司和Merck公司

。2.氨基酸混合溶液的配制

首先将氨基酸在105℃烘箱中干燥,随后在保干器内冷却至室温后准确称取一定量的样品,并将其转移至1L容量瓶中。然后使用经灭菌处理后的盐酸溶液(0.1mol/L)溶解样品,最后在20℃条件下定容。溶液浓度采用式(1)计算:C=m×pM×1000×l(1)式中:C——溶液的摩尔浓度,mol/L;m——氨基酸纯度标准物质的质量,mg;P——氨基酸标准物质的纯度;M——氨基酸的摩尔质量,g/mol;l——溶液体积,L。

二、氨基酸混合溶液的均匀性和稳定性检验

目前,多组分氨基酸的分析方法主要有柱前衍生液相色谱法、离子色谱法、柱后茚三酮衍生色谱法等。其中,柱后茚三酮衍生色谱法时间最长、技术最为成熟,具有结果稳定性好、准确度较高等特点。因此,在均匀性和稳定性检验过程中,我们采用了柱后茚三酮衍生色谱法。

1.氨基酸混合溶液的均匀性检验

通过对文献的查阅和结合实验过程,我们发现在盐酸溶液(0.1mol/L)中只有酪氨酸和胱氨酸的溶解性差,而其他的溶解都很好,所以在考察溶液均匀性的过程中选取以上两种氨基酸为代表进行检验,通过比较其峰面积的变化进而判定溶液的均匀性。具体做法如下:在配制的同一批次的氨基酸混合溶液中我们选择11个样品做瓶间均匀性评价,同时从其中任取1瓶取7个子样做瓶内评价,在95%的置信概率下采用F检验和t检验考察样品的均匀性。其结果如表1所示。

2.氨基酸混合溶液的稳定性检验

稳定性是指在一定时间内,在外界环境的影响下,物质的物理和化学特性保持不变的能力。在本实验过程中,针对调研中我们所了解到的氨基酸混合溶液在一定的条件下具有较长的稳定性的特点,我们选择了如表2中所示的4个时间段进行稳定性考察。通过比较在相同条件下不同时间段配制的17种常见氨基酸溶液浓度值的变化,衡量其稳定性。从表2中可以看出,在14个月内,氨基酸混合溶液的量值没有发生明显的趋势性变化,这说明我们所采取的配制方式和储存条件有效地保证了氨基酸量值的稳定性。