三磷酸腺苷（ATP）是以次黄嘌呤核苷酸为底物，经生物发酵技术制得的高能化合物，它是体内组织细胞一切生命活动所需能量的直接来源，参与新陈代谢以及各种生化反应。ATP含量可以清晰地表明样品中生物污染的程度2。

ATP与荧光素荧光素酶反应可以发出微弱的可见光，通过发出光的亮度可以准确地检测细菌数量。与传统检测方法（平板计数法）相比，这种方法检测速度快、灵敏度高，已得到普遍推广使用市场上已有进口和国产的多个品牌的ATP检测试剂盒，但是由于缺乏有证标准物质的监管，这些试剂盒中ATP标样的量值不统一，影响了检测结果的质量控制。

鉴于此，我们研制了ATP标准物质，为了合理地表征该标准物质量值的分散性，本文依据《测量不确定度评价与表示》（JF1059）的要求，形成了一套ATP标准物质的不确定度评定方案。

实验部分

1.1主要仪器与试剂

GC6890型高效液相色谱（美国 Agilent公司）；MS105DU型电子天平（瑞士 Mettler公司）； Mili-Q型超纯水制备系统（法国 Millipore公司）； pHs3C型pH计（上海雷磁仪器厂）；移液器（德国 Eppendorf公司）。
三羟甲基氨基甲烷（Tris）、盐酸、磷酸氢钠、磷酸二氢钾（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；甲醇（色谱纯， Merck公司）。ATP纯度标准物质（992%）为实验室自制。

1.2ATP溶液标准物质的制备

称量一定量的ATP固体，用0.025mol/L Tris-HCl缓冲液（pH8）配制成浓度约为1×10mol/L的ATP溶液，混匀后分装于1.5mL离心管中，共分装250瓶，置于-70℃条件下保存。

1.3高效液相色谱

检测条件高效液相色谱所用流动相为95%磷酸缓冲溶液（0.2mol/L）+5%甲醇，流速mL/min。液相色谱柱为C18柱（150mm×4.6mm）。

1.4ATP工作标准溶液的配制

称取59.80 mg ATP固体，用100mL容量瓶定容后，得到浓度为1×10mol/L的ATP浓溶液，该浓溶液用移液器依次稀释为5×10-4、2x10-、1×10-‘、5×10、2×10-5mol/L。每个浓度进样2次，取色谱峰面积平均值。