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胆固醇和甘油环糊精水溶液标准物质的研制

大C-会员头像-www.bzwz.com标准物质网 大C 0 530 2020-10-20
【摘要】目的研制胆固醇和甘油水溶液基质的标准物质。方法标准物质研究。以胆固醇标准物质GBWo9203b和甘油标准物质GBwo9149为原料,溶解到20%甲基环糊精溶液中,称量配制法制备6个浓度水平的候选标准物质。用常规方法进行均匀性和同步稳定性研究。用参考方法一同位素稀释液相色谱串联质谱(DDLC/MS/MS)测定候选标准物质以评价定值的准确性,同时进行空白验证试验。评价不均匀性、不稳定性和定值引入的不确定度,并计算总不确定度。结果6个浓度水平标准物质的研究结果显示均匀性良好,在-70℃和-20℃保存至少可稳定1年。定值结果(“标准值±扩展不确定度”,单位:mmoL)如下,胆固醇:0.65±0.01,1.31±0.01,257±0.02,5.21± 0.06,7.71±0.08,10.24±0.06;甘油:0.29±0.01,0.58±0.01,1,22±0.02,2.24±0.02,3.46±0.04, 4.52±0.04.参考方法测定结果与定值结果一致。空白验证结果显示试剂、空白基质不会对待测物的浓度产生影响。
  • 建立完善的临床检验量值溯源体系,首先要建立参考(标准)系统(包括参考测定程序和标准物质)。制备不同级别的标准物质是实现实验室间结果互认的基础,尤其是纯度标准物质作为量值溯源的源头,在量值传递过程中发挥着举足轻重的作用。国际上已经有相应的胆固醇纯度标准物质和血清标唯物质。国内也有相应的标准物质(胆固醇纯度标准物质GBW09203b和甘油标准物质GBW09149)、血清标物等。由于胆固醇不溶于水,在参考方法或常规测定中,通常将胆固醇溶于甲醇或乙醇中,以用作校准物或质控物,由于甲醇或乙醇挥发性较大,体积随温度变化较大,且基质同实际临味样本差距较大,容易引起测定结果的偏差。甘油极易溶于水,通常直接配制水溶液。目前尚没有商品化的含胆固醇和甘油两种项目的水溶液。

    本研究按照 ISO Guide352和国家一级标准物质技术规范(JG1006-1994)3的要求,以水溶液作为基质配制了6个浓度水平的标准溶液,包含胆固醇和甘油两个项目,分别称为RM1~RM6.本标准物质主要用于参考系统的校准或准确性评定,也可于具有互通性的常规系统中。

    材料与方法

    实验材料

    胆固醇纯度标准物质GBW09203b(白色粉末,卫生部北京老年医学研究所和国家标准物质研究中心,纯度99.7%,不确定度0.1%)。甘油标准物质GBwo9149(卫生部北京老年医学研究所,定值0.1036±0.0004g/g),此物质为纯度99.9%的甘油( Sigma公司,G-7893,lot96H0568)的水溶液,经滴定法定值。叠氮钠为白色粉末,纯度大于等于995%, Sigma公司产品。甲基-β-环糊精购自淄博千汇生物科技有限公司,纯度大于等于98%。、标准物质的制备

    1.胆固醇标准物质的干燥:GBW09203b放入玻璃平皿中铺开,真空干燥箱50℃减压干燥10h

    2.0.05%叠氮钠的配制:称取1g叠氮钠加去离子水至2L,混匀,得到浓度为0.05%的叠氮钠溶液。

    3.20%甲基B环糊精(MBCD)水溶液的配制:称取400 g mbcd加入到2L容量瓶中,加入1000g含0.05%的叠氮钠溶液,搅拌均匀后再加入600g0.05%叠氮钠溶液,使MBCD的终浓度约为20%(g/g),混匀后经0.45μm滤膜过滤,收取滤液作为所配制标准物质的溶剂。配制之前进行色谱质谱分析,检测不到胆固醇和甘油方可使用。

    4.胆固醇和甘油环糊精标准溶液的配制:配制6个浓度水平的胆固醇和甘油标准溶液,其对应的胆固醇浓度分别为25、50、100、200、300、400mg/dl
    (换算物质的量浓度为0.647、1.293、25865.1727.758和10.344mmol/L),甘油浓度分别为25、50、100、200、300、400mg/d(浓度约为0.2820.5651.1292.259、3.388和4.517mmo/L)。每个水平250ml,分别命名为RM1-RM6.准确称取约60.6、123、235、475、720和950mg的胆固醇标准物质GBW09203b和甘油标准物质GBW09149置于可密封的250m具盖容器中,分别向各容器中加入20%的MBCD滤液250g。标准物质用十万分之一天平称量,MBCD溶液用千分之一天平称量。记录加入的GBW09203b、GBW09149和MBCD溶液的准确质量。

    5.混合、分装、保存:将各配制好的标准溶液放置于混匀器上混匀后,按0.8m/支分装至2ml玻璃容器中,RMl~RM6各分装270支玻璃安瓿70℃保存。

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