０ 引言 　　

【研 究 意 义】胆 固 醇 作 为 影 响 健 康 的 重 要 物 质，不仅是疾病控制领域的重要检测对象，也是 计量领域液相色谱仪器检定的重要物质。标准物质 作为一种计量器具，由于其量值准确可靠，溯源链清 晰，对于准确检测胆固醇含量和保证仪器的计量准 确具有重要意义。【前人研究进展】目前，常见的胆固醇测定方法有液相色谱法（紫外检测器、蒸发光检 测器）和液相色谱-质谱联用法 ，运用液相色谱紫 外检测法对胆固醇标准物质进行均匀性、稳定性检 验和量值核验的文献较少。【本研究切入点】本研究 根据相关技术规范 ，基于液相色谱紫外检测法 对甲醇中胆固醇溶液标准物质进行研制。【拟解决 的关键问题】通过重量-容量法制备甲醇中胆固醇溶 液标准物质，并运用液相色谱法进行均匀性、短期稳 定性、长期稳定性检验和量值核验，研制了甲醇中胆 固醇溶 液 标 准 物 质，标 准 值 为 ２００ μｇ／ｍＬ（Ｕ ｒｅｌ ＝ ２％，ｋ ＝２），用于测量仪器校准、测量过程质量控制 及分析方法确认和评价。

１ 材料与方法

１．１ 材料

１．１．１ 试剂

胆固醇：采用中昊光明化工研究设计院有限公 司研制的二氧化硫纯度标准物质，其编号为 ＧＢＷ （Ｅ）０６００６３，纯度标准值为 ９９．９９％，相对扩展不确 定度为 ０．０１％（ｋ ＝２）。 　　甲醇：采用德国进口的 Ｍｅｒｃｋ 无水甲醇试剂。

１．１．２ 仪器

气相色谱-质谱联用仪：ＧＣＭＳ-ＱＰ ２０１０ Ｕｌ - ｔｒａ；色谱柱（Ｒｔｘ-５ＭＳ，３０ ｍ×０．２５ ｍｍ ＩＤ×０．２５ μｍ）；液相色谱仪：ＬＣ-２０ＡＴ 泵，ＳＰＤ-２０Ａ 紫外检测 器；色谱柱（Ｃ１８ 色谱柱）；天平：电子天平（ＡＥ２００， ＭＥＴＴＬＥＲ ＴＯＬＥＤＯ）；电子天平（ＣＰＡ２２５Ｄ，Ｓａｒ- ｔｏｒｉｕｓ）；精密恒温水浴：ＹＣＣ-１，宁波天恒；空盒气压 表：ＤＹＭ３，长春气象局；容量瓶：１ ０００ ｍＬ，Ａ 级合 格；一等标准密度计：０．６５～１．９５ ｇ／ｃｍ３ ，浙江余姚 比重计厂。

１．２ 方法

１．２．１ 甲醇测试方法

测试条件：进样口温度 ２８０℃，分流比 １００∶１， 柱流量 １．０ ｍＬ／ｍｉｎ，载气为 Ｈｅ；程序升温方式：在 ３５℃保持 ４ ｍｉｎ，然后以 ５℃／ｍｉｎ 速率升至 １００℃， 再以 １０℃／ｍｉｎ 升至 ２８０℃。测试结果如图 １ 所示。

１．２．２ 胆固醇测试方法

均匀性、短期稳定性和长期稳定性检验测量条 件：流动相为 １００％甲醇，流速 １．０ ｍＬ／ｍｉｎ，检测波 长 ２０７ ｎｍ，柱温 ４０℃。

１．２．３ 制备

用十万分之一天平准确称取 ０．２００ ６０ ｇ 的胆 固醇纯度 标 准 物 质，用 色 谱 纯 甲 醇 溶 解 并 定 容 至 １ ０００ ｍＬ容量瓶中，混匀。配制时，容量瓶和甲醇 试剂放在 ２０℃的恒温水浴中，保证容量瓶和甲醇试 剂体积的准确。 　　将甲醇中胆固醇溶液标准物质转移至分装玻璃 试剂瓶中，先放在冰箱里于 ４℃避光静置，然后运用 瓶口分液器移取 ３ ｍＬ 标准溶液至各 ５ ｍＬ 棕色安 瓿瓶中，迅速对安瓿瓶进行封口，分装时环境温度为 （２０± ５）℃，环 境 湿 度 为 （４０ ± １０）％。配 制 １ ０００ ｍＬ 标准溶液共分装甲醇中胆固醇溶液标准物质 ２００ 瓶。该标准物质需冷藏保存。

１．２．４ 短期稳定性检验

为评估在短期运输条件下标准物质的稳定性， 对研制的标准物质进行了短期稳定性试验。将甲醇 中胆固醇溶液标准物质分别随机抽取 样 品，放 在 ４℃、６０℃贮存 ７ ｄ，其中 ４℃通过放在冰箱中实现， ６０℃通过放在烘箱中实现。在这 ７ ｄ 内，分别在第 ０，１，２，３，４，５，６，７ 天放置随机抽取的样品，于第 ８ 天统一测试。 　　

用液相色谱仪紫外检测器对所抽取的各个样品 进行测定，重复测定 ３ 次。测量前，先将标准物质样 品避光放置在室温条件下平衡一段时间。各样品胆 固醇的浓度值基于峰面积由新配制的甲醇中胆固醇 溶液标准物质作为标准，将各测试值换算为浓度值。

１．２．５ 长期稳定性

为了评价标准物质的稳定性，在贮存期间必须 定期对标准物质进行抽样测定（贮存条件为存放于 阴凉避光的室温条件下）。在每一次抽样测量过程 中，运用液相色谱法测试各样品中胆固醇的含量，并 控制环境条件尽量一致，使测量结果之间的差异着 重反映出物质变化所引起的差异。根据“一级标准 物质技术规范”的要求，对研制的甲醇中胆固醇溶液 标准物质，基于先密后疏的原则，进行 １６ 个月的稳 定性检验。 　　

基于色谱峰面积，采用新配制的 ２００ μｇ／ｍＬ 的 甲醇中胆固醇溶液标准物质作为标准给测试的样品 浓度进行赋值。