硫酸异帕米星( isepamicin) 结构式见图 1，是 由日本旭化成制药株式会社和美国先令公司共同 研发的半合成氨基糖苷类抗生素，是在庆大霉素 B ( gentamicin B) 的 1 位氨基上引入异丝氨酸所得，称 为 1-N［( S) -3-氨基-2-羟基丙酰基］庆大霉素 B( 1-NHAPA gentamicin B) ，临床所用为其硫酸盐。

目前，该品种及其注射液收载于《中华人民共和国 药典》( ChP) 2015 年 版 和《日 本 药 局 方》第 17 版。目前对硫酸异帕米星及其杂质的结构研究 较少，王建等采用 HPLC-MS 和 NMＲ 法对硫酸异 帕米星原料药中 1 个有关物质进行了结构鉴定，并 研究了其抗菌活性。

为了该药物的质量控制，有必要对其核磁数据 进行准确归属。硫酸异帕米星为氨基糖苷类抗生 素，由于氨基糖苷类抗生素结构中无发色团，无法采 用紫外检测器，但可采用蒸发光散射检测器( evaporative light-scattering detector，ELSD) 、积分安培检测 器( integrated amperometric detector，IAD) 或脉冲安 培检测器( pulsed amperometric detector，PAD) 进行 有关物质或含量检测。对于硫酸异帕米星的检测， 《中华人民共和国药典》( ChP) 2015 年版采用 HPLCELSD 法而《日本药局方》采用柱后衍生化-HPLC 荧 光检测法测定有关物质和含量，各有优劣。

本 研 究 采 用1 H-NMＲ，13 C-NMＲ，1 H-1 H COSY， DEPT，HSQC 和 HMBC 谱，首次对硫酸异帕米星中 异帕米星的1 H 和13C 信号进行准确归属。此外，以 《中华人民共和国药典》( ChP) 2015 年版二部“硫 酸异帕米星含量及有关物质测定方法”为基础的 质量平衡法对硫酸异帕米星中异帕米星的含量进 行确定，并采用核磁定量方法对上述结果进行了 佐证。

材料与方法

1 试药

三氟乙酸、甲酸、乙腈均购自 Fisher 公司( 色谱 纯) ; 硫酸异帕米星原料药( 旭化成制药株式会社提 供，批号: HPB-40000016317) ; 顺丁烯二酸( Sigma 公 司，含量: 99． 99% ) 。

2 仪器

岛津 LC 20AD 液相色谱仪( 配有 PDA 检测 器，LabSolution 工作站，日本岛津公司) ; AB Sciex 3200 Qtrap 质谱仪( 美国 AB SCIEX 公司) ; Shiseido Nanospace 高效液相色谱仪( 配有 Analyst 工作站， 日本资生 堂 公 司) ; DL38 水分 滴 定 仪( Mettler 公 司) ; Bruker Avance Ⅱ400 核磁 共 振 谱 仪( Bruker 公司) 。

3 结构解析

3． 1 质谱分析

称取供试品适量，加水溶解并用甲 醇∶ 水( 1∶ 1) 溶液稀释成 110 μg·mL － 1的溶液，摇匀备用。液相色谱-质谱联用分析: ESI 正离子模式; 电 喷雾电压为 4 500 V; 气 帘 气 压 力 ( Curtain Gas) : 20 psi; 离子源温度: 500 ℃ ; 雾化气( GS1) : 60 psi; 辅 助气( GS2) : 65 psi; 碰撞 气( CAD) : 高; 去簇 电 压 ( DP) : + 30． 0 V; 入口电压( EP) : + 10． 0 V; 碰撞入 口电压( CEP) : + 19． 00 V; 碰撞电压( CE) : + 10． 00 V; 碰撞室出口电压( CXP) : + 3． 00 V。

3． 2 核磁分析

称取供试品适量，置于石英核磁管 中，用 氘 带 重 水 ( D2O) 为溶 剂 溶 解，采 用 Bruker AvanceⅡ 400 核 磁 共 振 谱 仪 进 行 1 H-NMＲ，13CNMＲ，1 H-1 H COSY，DEPT，HSQC 和 HMBC 的测定。

3． 3 比旋度

按照《中华人民共和国药典》( ChP) 2015 年版硫酸异帕米星品种相关测定方法进行 测定。