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PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测分析

周世红-会员头像-www.bzwz.com伟业计量
周世红 2021-05-15 10:10 评论( 0 ) 浏览( 1359 )

琼脂糖凝胶电泳是检测PCR扩增产物最常用的方法之一。

核酸凝胶电泳结果的检测方法有溴化乙锭染色、银染色及同位素放射自显影等,其中溴化乙锭染色法较为普遍。溴化乙锭(Ethidium Bromide,简称EB)是一种荧光剂,由于溴化乙锭分子插入在DNA双螺旋结构的两个碱基之间后,能形成一种在紫外光激发下发出很强橙红色荧光的络合物,所以十分容易观察。检测的灵敏度非常高,1μg/mL的溴化乙锭溶液可检出10ng或更少的DNA样品。演化乙锭产生的荧光在紫外光源下放置时间过长能被淬灭,也容易受一些化学物质的污染而淬灭。溴化乙锭是一种DNA诱变剂,使用时应注意避免与皮肤接触。实验室中的EB污染物应妥善处理,EB溶液的污染物不能直接倒入下水道及垃圾中,含有EB的凝胶应在干燥后烧毁。

用琼脂糖凝胶电泳法测定DNA片段的分子质量,是在同一块凝胶板上样品槽中加待测样品,加一个标准分子量样品同时进行电泳,然后用溴化乙锭染色,通过生物凝胶成像分析系统或紫外灯比较样品与标准品的位置,即可估计出待测样品的分子量大小范围。

相关链接:琼脂糖凝胶溴化乙锭同位素EB溶液

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