液相色谱标准操作流程 一、流动相准备与仪器启动 ‌流动相配制与处理‌ 选择色谱纯试剂（如乙腈、甲醇、水），按比例配制后需超声脱气30分钟以上，避免气泡干扰检测‌。 流动相使用前需过0.45μm滤膜，确保无颗粒物残留‌。 ‌仪器启动与系统冲洗‌ 开机后，将流动相管路浸入溶剂瓶，开启泵并逐步提高流速至5ml/min，排出管路和泵头内气泡（约5-6分钟）‌。 切换流动相通道（如纯水→有机相），以1ml/min流速冲洗系统10-15分钟，观察压力稳定在正常范围（如28.79bar）‌。 二、色谱柱安装与平衡 ‌装柱与检测‌ 色谱柱安装需确保两端接口无空隙，流动相从柱端呈抛物线状喷出为正常‌。 初次使用或更换流动相时，需用初始比例流动相平衡色谱柱至基线稳定（通常需30分钟以上）‌。 三、方法设置与参数优化 ‌方法建立‌ 在软件中设置流速（如1.0ml/min）、检测波长（如280nm）、进样体积（如5μl）及梯度程序‌。 梯度洗脱时需插入时间表，按预设比例调整流动相（如乙腈-水从20%升至80%）‌。 ‌压力与基线监控‌ 观察联机界面压力曲线和色谱图基线，若基线波动或压力异常（如骤升或骤降），需排查气泡、柱堵塞或流动相污染‌。 四、样品处理与进样 ‌样品前处理‌ 样品需溶解于流动相或低极性溶剂（如甲醇），难溶样品可用硅胶拌样后干法上样‌。 上样前需过0.45μm滤膜，避免颗粒物堵塞色谱柱‌。 ‌进样操作‌ 使用定量环进样（如10μl），确保进样体积准确‌。 首次检测时，需进空白溶剂、对照品和供试品各一针，观察分离度及杂质峰位置‌。 五、关机与维护 ‌1、系统清洗‌，实验结束后，用纯水冲洗管路30分钟，再用20%甲醇冲洗30分钟，避免盐析或有机相残留‌。 C18柱长期保存需用高比例甲醇（如80%）浸泡‌。 2、废液处理与记录‌：废液需分类收集（含有机溶剂、无机盐等），按实验室规范处理‌。记录压力波动、基线漂移等异常情况，用于后续分析优化‌。 六：关键注意事项 ‌1、色谱柱保护‌：避免高压冲击（流速调整需以0.1ml/min逐步增减）和温度剧烈变化‌。 2‌、流动相兼容性‌：含盐流动相需先用水冲洗再切换至有机相，防止盐结晶‌。 3‌、数据完整性‌：保存原始图谱及方法参数，便于复现与审计追踪‌。